TREM-1 Plasmídeo de ativação de CRISPR (m): sc-425490-ACT

O gene Trem1 de camundongo codifica o TREM-1, um imunorreceptor da família TREM expresso predominantemente por células da linhagem mieloide, como neutrófilos e monócitos/macrófagos. Por meio da associação com o adaptador TYROBP/DAP12 e da sinalização a jusante dependente de ITAM, o TREM-1 amplifica respostas inflamatórias, promovendo a produção de citocinas e quimiocinas e moldando a ativação da imunidade inata. A sinalização de TREM-1 interage com vias de receptores de reconhecimento de padrões, incluindo respostas mediadas por receptores Toll-like, para modular o recrutamento de leucócitos, a desgranulação e o grau/tônus de inflamação tecidual. A atividade desregulada de TREM-1 tem sido associada a inflamação excessiva em contextos infecciosos e de inflamação estéril, tornando o Trem1 um alvo relevante para estudos mecanísticos de imunopatologia impulsionada por células mieloides.

TREM-1 O Plasmídeo de Ativação CRISPR (m) oferece uma abordagem direcionada e não destrutiva para regular positivamente a expressão endógena de Trem1 sem alterar a sequência de ADN subjacente.

TREM-1 O Plasmídeo de Ativação CRISPR (m) é um sistema mediador de ativação sinérgica (SAM) de três plasmídeos, concebido para a regulação positiva transcricional altamente eficiente e específica do locus Trem1 em linhas celulares humanas. O sistema é construído em torno de uma Cas9 cataliticamente inativa (dCas9) portadora de duas mutações inativadoras (D10A e N863A) que eliminam a atividade nuclease, preservando simultaneamente a ligação ao ADN. Esta dCas9 é fundida com VP64, um potente ativador transcricional, e é coexpressa com um gene de resistência à blasticidina para seleção. O segundo plasmídeo codifica a proteína de fusão MS2-p65-HSF1, um complexo ativador secundário que atua em conjunto com o dCas9-VP64, juntamente com um gene de resistência à higromicina. O terceiro plasmídeo codifica um sgRNA de 20 nt específico para o alvo, fundido a dois aptâmeros de RNA MS2 que recrutam o complexo MS2-p65-HSF1 para o local de ativação, acompanhado por um gene de resistência à puromicina. Os três plasmídeos são administrados numa proporção de massa de 1:1:1 para uma expressão equilibrada de todos os componentes do sistema.

Uma vez montado no locus alvo, o complexo SAM liga-se a cerca de 200 pb a montante do local de início da transcrição Trem1, onde VP64, p65 e HSF1 atuam em conjunto para recrutar a maquinaria transcricional e impulsionar a regulação positiva da expressão endógena de TREM-1. Ao contrário da Cas9 com atividade nuclease, o dCas9 não introduz quebras de cadeia dupla nem modifica a sequência genómica, preservando o locus Trem1 nativo e permitindo o estudo de respostas transcricionais dependentes de TREM-1 no locus endógeno, tornando-o uma ferramenta valiosa para estudos funcionais, identificação de genes-alvo e modelagem da restauração da via TREM-1 em células tumorais com expressão de Trem1 silenciada ou reduzida.

Apenas para uso em investigação. Não se destina a uso diagnóstico ou terapêutico.