Trap1a CRISPR/Cas9 KOプラスミド (m): sc-423500

概要

Trap1aは、ミトコンドリア内でクライアントタンパク質を安定化させ、折りたたみを促進することでプロテオスタシスを支える、ミトコンドリアHSP90ファミリーのシャペロンをコードします。Trap1aはミトコンドリア呼吸、活性酸素種（ROS）の恒常性、ならびにストレス適応シグナル伝達に影響し、アポトーシスや代謝リプログラミングを制御する経路と統合的に関与します。酸化的リン酸化の効率やミトコンドリア品質管理を調節することで、Trap1aは低酸素、栄養制限、プロテオトキシックストレスに対する細胞応答に寄与します。TRAP1活性の破綻は、神経変性や腫瘍関連の代謝表現型など、複数の疾患関連状況で見られる生体エネルギーの変化やストレス耐性の変動と関連づけられており、マウスモデルにおける機構解析の標的として有用です。

Trap1a CRISPR/Cas9 KOプラスミド（m）は、mouse細胞株におけるTrap1a遺伝子の標的破壊を目的として設計されたプラスミドのプールである。各プラスミドは、Trap1a内の異なる部位を標的とする固有のシングルガイドRNA（sgRNA）と、Streptococcus pyogenes由来のCas9ヌクレアーゼを共発現します。また、これらのプラスミドはGFPをコードしており、蛍光顕微鏡やフローサイトメトリーを用いて、トランスフェクションに成功した細胞を蛍光で識別・濃縮することが可能です。

このマルチガイド設計により、Cas9による二本鎖切断の形成後に、Trap1aのオープンリーディングフレームを破壊する挿入または欠失（インデル）が生じる可能性が高まります。CRISPR/Cas9システムによって導入されたDNA切断は、内因性の非相同末端結合（NHEJ）経路を通じて修復され、その結果、Trap1aタンパク質の発現を阻害するフレームシフト変異が生じることが頻繁にあります。

このCRISPRノックアウトシステムにより、Trap1aシグナル伝達、機能ゲノミクス研究、がん生物学研究、およびヒト細胞株における治療反応の評価を目的とした、Trap1a欠損細胞モデルの効率的な作製が可能となる。

主な特徴

• Trap1aの機能に不可欠なTrap1aエクソンを標的とするsgRNA
  導入を簡素化するための、単一プラスミドからのSpCas9およびsgRNAの共発現
  トランスフェクトされた細胞を識別するためのGFPレポーター
  ノックアウト効率を向上させるための、Trap1aゲノム上の複数の部位を標的とするプラスミドのプール
  トランスフェクションによる導入に対応

設計バリエーション

CRISPRs +/- HDR

• Trap1a CRISPR/Cas9 KOプラスミド（m）およびTrap1a CRISPR/Cas9 KOプラスミド（m2）によってコードされるgRNAは、Trap1a遺伝子座内の異なる部位を標的としています。いずれか一方、または両方の標的設計が利用可能な場合があります。入手可能性については「関連製品」を参照してください。
  Trap1a HDRプラスミド（m）および Trap1a HDRプラスミド（m2）によってコードされるHDRドナー構築体は、プロマイシン耐性カセットとRFPレポーターを含み、これらはTrap1aホモロジーアームに挟まれており、CRISPR/Cas9 KO設計に対応する特定のTrap1a標的部位でのホモロジー依存修復をサポートします。HDRドナーの入手可能性は異なる場合があります。入手可能性については「関連製品」をご確認ください。

研究用のみ。診断用または治療用ではありません。