Not CRISPR data: the image illustrates antibody quality for visualizing CRISPR experiment results.
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TRAP150 Double Nickase Plasmid (m): sc-432980-NIC
- Zielspezies: mouse
- 20 µg transfektionsfertige, aufgereinigte Plasmid DNA; geeignet für 20 Transfektionen
- Das TRAP150 Double Nickase Plasmid (m) wird als Plasmid-Paar geliefert. Die einzelnen Plasmide kodieren für eine D10A mutierte Cas9 Nuklease sowie für je eine unterschiedliche, zielspezifische 20nt guide RNA (gRNA) Sequenz. Dies erlaubt eine hohe Knockout-Effizienz bei gleichzeitig größerer Spezifität als das entsprechende CRISPR/Cas9 KO Plasmid
- gRNA Sequenzpaare liegen ca. 20 bp auseinander um ein spezifisches Cas9-vermitteltes "Double Nicking" der genomischen DNA zu erlauben und so im Resultat den Effekt eines Doppelstrangbruchs nachzuahmen.
- Ein Plasmid kodiert für ein Puromycin-Resistenzgen zur Selektion von stabilen Knockout-Zellen. Das andere Plasmid kodiert für ein GFP-Gen für den visuellen Nachweis der Transfektion
- TRAP150 Double-Nickase-Plasmid (m) und TRAP150 Double-Nickase-Plasmid (m2) kodieren unterschiedliche gepaarte gRNA-Designs, die auf Thrap3 abzielen. Möglicherweise ist eines oder sind beide Designs verfügbar
- Nach der Transfektion kann die Effizienz des Gen-Knockouts per Western Blot oder histologisch mit folgendem Antikörper überprüft werden: TRAP150: sc-133250
Bestellinformation
| Produkt | Katalog # | EINHEIT | Preis | ANZAHL | Favoriten | |
TRAP150 Double Nickase Plasmid (m) | sc-432980-NIC | 20 µg | $410.00 | |||
TRAP150 Double Nickase Plasmid (m2) | sc-432980-NIC-2 | 20 µg | $410.00 |
Mouse Thrap3 kodiert TRAP150, einen nukleären RNA-bindenden und transkriptionsassoziierten Faktor, der an der Kopplung von Transkription mit dem Spleißen von prä-mRNA und der 3′-End-Prozessierung beteiligt ist. TRAP150 wirkt an der Reifung von mRNPs mit und interagiert mit Komponenten des Spleißosoms sowie der Transkriptionsmaschinerie, wodurch es Entscheidungen zur alternativen Spleißung und Genexpressionsprogramme beeinflusst. Diese Funktionen verknüpfen Thrap3 mit der Regulation des Zellzyklusfortschritts und stressresponsiven Transkriptionsnetzwerken, die in der Krebsbiologie häufig gestört sind. Die mit der TRAP150-Aktivität verbundene veränderte Spleiß- und Transkriptionskoordination macht dieses Gen relevant für die Untersuchung von Mechanismen, die einer onkogenen Genexpression und Defekten der RNA-Prozessierung zugrunde liegen.
TRAP150 Das Double-Nickase-Plasmid (m) besteht aus einem aufeinander abgestimmten Plasmidpaar, das für die hochspezifische Bearbeitung des Thrap3-Lokus in mouse-Zelllinien entwickelt wurde. Jedes Plasmid exprimiert eine Cas9-D10A-Nickase und eine spezifische sgRNA, die auf entgegengesetzte DNA-Stränge innerhalb von Thrap3 abzielt. Wenn sie auf benachbarte Stellen auf entgegengesetzten DNA-Strängen gerichtet sind, erzeugen die beiden Nickasen versetzte Einzelstrang-Schnitte, die zusammen einen versetzten Doppelstrangbruch erzeugen, was eine koordinierte On-Target-Aktivität beider Guides erfordert. Der resultierende DNA-Bruch wird durch endogene zelluläre Reparaturwege behoben, meist durch nicht-homologe Endverknüpfung (NHEJ), was zu Insertionen oder Deletionen führt, die die Thrap3-Funktion stören. Durch die Notwendigkeit einer doppelten sgRNA-Bindung am Zielort erhöht der Doppel-Nick-Ansatz die Spezifität der Bearbeitung und bietet eine komplementäre CRISPR-Strategie für Anwendungen, bei denen eine zusätzliche Kontrolle über die Zielgenauigkeit gewünscht ist.
Um eine effiziente Identifizierung editierter Zellen zu unterstützen, kodiert ein Plasmid GFP zur fluoreszierenden Visualisierung transfizierter Populationen, während das Begleitplasmid ein Puromycin-Resistenzgen für die Antibiotika-Selektion trägt. Zusammen unterstützen diese Merkmale eine effiziente Anreicherung co-transfizierter Populationen und vereinfachen die Validierung von Klonen mit Thrap3-Störung.
Nur für Forschungszwecke. Nicht für diagnostische oder therapeutische Zwecke bestimmt.