TRAP-1 Plasmídeo de ativação de CRISPR (h): sc-402963-ACT

O gene humano TGFBRAP1 codifica a TRAP-1, um fator acessório implicado na sinalização do receptor do fator de crescimento transformador-β (TGF-β) e em processos de tráfego intracelular que influenciam a maturação, a estabilidade e a propagação de vias a jusante do receptor. Ao modular a eficiência e o contexto de programas transcricionais dependentes de SMAD, a TRAP-1 pode afetar desfechos celulares como controle da proliferação, diferenciação, remodelamento da matriz extracelular e a comunicação cruzada com vias de sinalização relacionadas à imunidade. Alterações na dinâmica da via de TGF-β estão amplamente associadas à fibrose, à reprogramação de sinalização ligada ao câncer e à biologia de doenças inflamatórias, tornando a TRAP-1 um nó útil para estudos mecanísticos de ajuste fino da via. A expressão e a investigação funcional de TGFBRAP1 dão suporte a pesquisas sobre a arquitetura da transdução de sinal, complexos associados a receptores e respostas transcricionais dependentes do contexto.

TRAP-1 O Plasmídeo de Ativação CRISPR (h) oferece uma abordagem direcionada e não destrutiva para regular positivamente a expressão endógena de TGFBRAP1 sem alterar a sequência de ADN subjacente.

TRAP-1 O Plasmídeo de Ativação CRISPR (h) é um sistema mediador de ativação sinérgica (SAM) de três plasmídeos, concebido para a regulação positiva transcricional altamente eficiente e específica do locus TGFBRAP1 em linhas celulares humanas. O sistema é construído em torno de uma Cas9 cataliticamente inativa (dCas9) portadora de duas mutações inativadoras (D10A e N863A) que eliminam a atividade nuclease, preservando simultaneamente a ligação ao ADN. Esta dCas9 é fundida com VP64, um potente ativador transcricional, e é coexpressa com um gene de resistência à blasticidina para seleção. O segundo plasmídeo codifica a proteína de fusão MS2-p65-HSF1, um complexo ativador secundário que atua em conjunto com o dCas9-VP64, juntamente com um gene de resistência à higromicina. O terceiro plasmídeo codifica um sgRNA de 20 nt específico para o alvo, fundido a dois aptâmeros de RNA MS2 que recrutam o complexo MS2-p65-HSF1 para o local de ativação, acompanhado por um gene de resistência à puromicina. Os três plasmídeos são administrados numa proporção de massa de 1:1:1 para uma expressão equilibrada de todos os componentes do sistema.

Uma vez montado no locus alvo, o complexo SAM liga-se a cerca de 200 pb a montante do local de início da transcrição TGFBRAP1, onde VP64, p65 e HSF1 atuam em conjunto para recrutar a maquinaria transcricional e impulsionar a regulação positiva da expressão endógena de TRAP-1. Ao contrário da Cas9 com atividade nuclease, o dCas9 não introduz quebras de cadeia dupla nem modifica a sequência genómica, preservando o locus TGFBRAP1 nativo e permitindo o estudo de respostas transcricionais dependentes de TRAP-1 no locus endógeno, tornando-o uma ferramenta valiosa para estudos funcionais, identificação de genes-alvo e modelagem da restauração da via TRAP-1 em células tumorais com expressão de TGFBRAP1 silenciada ou reduzida.

Apenas para uso em investigação. Não se destina a uso diagnóstico ou terapêutico.