Transketolase Plasmídeo CRISPR/Cas9 KO (m): sc-423410

Visão geral

O gene Tkt de camundongo codifica a transcetolase, uma enzima dependente de pirofosfato de tiamina que catalisa reações reversíveis de transferência de carbono no ramo não oxidativo da via das pentoses fosfato. Ao interconverter fosfatos de açúcares, a transcetolase sustenta a produção de ribose-5-fosfato para a biossíntese de nucleotídeos e ajuda a equilibrar intermediários da glicólise e da via das pentoses fosfato para manter as necessidades celulares de redox e anabolismo. A atividade de TKT está, portanto, ligada ao metabolismo proliferativo, à adaptação ao estresse mitocondrial e oxidativo por meio de processos dependentes de NADPH e a um controle mais amplo do fluxo de carboidratos. Alterações no direcionamento da via das pentoses fosfato e na expressão de transcetolase têm sido associadas à desregulação metabólica e a fenótipos metabólicos associados a tumores, tornando Tkt um alvo útil para estudos mecanísticos de remodelamento metabólico.

O Plasmídeo CRISPR/Cas9 KO Transketolase (m) é um conjunto de plasmídeos concebido para a interrupção direcionada do gene Tkt em linhas celulares mouse. Cada plasmídeo coexpressa um RNA guia único (sgRNA) direcionado a um local distinto dentro do Tkt, juntamente com a nuclease Cas9 de Streptococcus pyogenes. Os plasmídeos também codificam GFP, permitindo a identificação fluorescente e o enriquecimento de células transfectadas com sucesso por microscopia de fluorescência ou citometria de fluxo.

O design multiguia aumenta a probabilidade de gerar inserções ou deleções (indels) que interrompem o quadro de leitura aberto do Tkt na sequência da formação de quebras de cadeia dupla mediadas por Cas9. As quebras de ADN introduzidas pelo sistema CRISPR/Cas9 são reparadas através de vias endógenas de junção de extremidades não homólogas (NHEJ), resultando frequentemente em mutações de deslocamento de quadro que abolir a expressão da proteína Transketolase.

Este sistema de knockout CRISPR permite a geração eficiente de modelos celulares com deficiência de Tkt para a investigação da sinalização de Transketolase, estudos de genómica funcional, investigação em biologia do cancro e avaliação de respostas terapêuticas em linhas celulares humanas.

Características principais

• sgRNAs direcionados para o(s) exão(ões) Tkt críticos para a função Transketolase
  Coexpressão de SpCas9 e sgRNA a partir de um único plasmídeo para simplificar a administração
  Repórter GFP para identificação de células transfectadas
  Conjunto de plasmídeos direcionados para múltiplos locais genómicos Tkt para melhorar a eficiência do knockout
  Compatível com administração por transfecção

Variantes de Design

CRISPRs +/- HDRs

• Os gRNAs codificados pelo Transketolase Plasmídeo CRISPR/Cas9 KO (m) e pelo Transketolase Plasmídeo CRISPR/Cas9 KO (m2) têm como alvo locais distintos dentro do locus Tkt. Pode estar disponível um ou ambos os designs de alvo. Consulte Produtos Relacionados para verificar a disponibilidade.
  As construções doadoras HDR codificadas pelo Transketolase Plasmídeo HDR (m) e o Plasmídeo HDR Transketolase (m2) contêm uma cassete de resistência à puromicina e um repórter RFP flanqueado por braços de homologia Tkt para suportar a reparação dirigida por homologia em locais-alvo Tkt definidos, correspondentes aos desenhos de KO CRISPR/Cas9. A disponibilidade do doador HDR pode variar. Consulte Produtos Relacionados para verificar a disponibilidade.

Apenas para uso em investigação. Não se destina a uso diagnóstico ou terapêutico.