TRAF3 Double Nickaseプラスミド (h): sc-400473-NIC

TRAF3（TNF受容体関連因子3）は、TNF受容体スーパーファミリー、Toll様受容体（TLR）、および一部のパターン認識受容体の下流で起こるシグナル伝達を統合するアダプター分子であり、E3ユビキチンリガーゼでもあります。ユビキチン依存的なシグナル伝達複合体の組み立てを制御することで、TRAF3はI型インターフェロン応答、MAPK活性、NF-κB経路の出力を調節します。これには、NIKの安定性を制御することによって非カノニカルNF-κBシグナルを抑制する作用も含まれます。これらの機能により、TRAF3は自然免疫および獲得免疫の恒常性を規定する重要な因子として位置づけられ、サイトカイン産生、抗原受容体シグナル、細胞生存の意思決定に影響を与えます。TRAF3の発現や機能の変化は免疫制御異常と関連し、悪性腫瘍に伴うシグナル伝達の文脈でも報告されていることから、炎症およびがん生物学研究における機構的ハブ（要所）としての有用性が示唆されています。

TRAF3 ダブルニカースプラスミド（h）は、human 細胞株における TRAF3 座の高特異性編集のために設計された、対となる2つのプラスミドから構成される。各プラスミドは、Cas9 D10Aニカースと、TRAF3内の対向するDNA鎖を標的とする異なるsgRNAを発現する。対向するDNA鎖上の隣接する部位に誘導されると、2つのニカースはオフセットした一本鎖切断を生成し、これらが組み合わさってずれた二本鎖切断を生じさせる。これにより、両方のガイドによる協調的なオンターゲット活性が必要となる。生じたDNA切断は、細胞内の内在性修復経路、特に非相同末端結合（NHEJ）によって修復され、その結果、TRAF3の機能を阻害する挿入または欠失が生じる。標的座標における2つのsgRNAの結合を必要とするこの二重ニッキング法は、編集の特異性を高め、標的精度に対するさらなる制御が求められる用途において、CRISPR戦略を補完するものである。

編集された細胞を効率的に同定するために、1つのプラスミドはトランスフェクトされた細胞集団を蛍光可視化するためのGFPをコードし、もう1つのプラスミドは抗生物質選別用のプロマイシン耐性遺伝子を保有しています。これらの機能により、共トランスフェクトされた細胞集団の効率的な濃縮が可能となり、TRAF3が破壊されたクローンの検証が簡素化されます。

研究用のみ。診断用または治療用ではありません。