TRAF3 Plasmídeo de ativação de CRISPR (h): sc-400473-ACT

TRAF3 (fator associado ao receptor de TNF 3) é um adaptador citoplasmático e ligase de ubiquitina E3 que conecta sinais de membros da superfamília de receptores de TNF, receptores do tipo Toll e receptores do tipo RIG-I a programas inflamatórios e antivirais a jusante. Ele modula nós-chave de sinalização que controlam a indução de interferon tipo I e a saída das vias NF-κB e MAPK, regulando a montagem dependente de ubiquitina de complexos proximais ao receptor. Em células imunes, o TRAF3 ajuda a equilibrar respostas inatas e adaptativas, influenciando a homeostase de células B, a produção de citocinas e o reconhecimento de patógenos. Alterações na atividade ou na expressão de TRAF3 têm sido associadas à desregulação imune e a fenótipos ligados à inflamação, sendo frequentemente investigadas no contexto da sinalização oncogênica e da biologia de neoplasias hematológicas.

TRAF3 O Plasmídeo de Ativação CRISPR (h) oferece uma abordagem direcionada e não destrutiva para regular positivamente a expressão endógena de TRAF3 sem alterar a sequência de ADN subjacente.

TRAF3 O Plasmídeo de Ativação CRISPR (h) é um sistema mediador de ativação sinérgica (SAM) de três plasmídeos, concebido para a regulação positiva transcricional altamente eficiente e específica do locus TRAF3 em linhas celulares humanas. O sistema é construído em torno de uma Cas9 cataliticamente inativa (dCas9) portadora de duas mutações inativadoras (D10A e N863A) que eliminam a atividade nuclease, preservando simultaneamente a ligação ao ADN. Esta dCas9 é fundida com VP64, um potente ativador transcricional, e é coexpressa com um gene de resistência à blasticidina para seleção. O segundo plasmídeo codifica a proteína de fusão MS2-p65-HSF1, um complexo ativador secundário que atua em conjunto com o dCas9-VP64, juntamente com um gene de resistência à higromicina. O terceiro plasmídeo codifica um sgRNA de 20 nt específico para o alvo, fundido a dois aptâmeros de RNA MS2 que recrutam o complexo MS2-p65-HSF1 para o local de ativação, acompanhado por um gene de resistência à puromicina. Os três plasmídeos são administrados numa proporção de massa de 1:1:1 para uma expressão equilibrada de todos os componentes do sistema.

Uma vez montado no locus alvo, o complexo SAM liga-se a cerca de 200 pb a montante do local de início da transcrição TRAF3, onde VP64, p65 e HSF1 atuam em conjunto para recrutar a maquinaria transcricional e impulsionar a regulação positiva da expressão endógena de TRAF3. Ao contrário da Cas9 com atividade nuclease, o dCas9 não introduz quebras de cadeia dupla nem modifica a sequência genómica, preservando o locus TRAF3 nativo e permitindo o estudo de respostas transcricionais dependentes de TRAF3 no locus endógeno, tornando-o uma ferramenta valiosa para estudos funcionais, identificação de genes-alvo e modelagem da restauração da via TRAF3 em células tumorais com expressão de TRAF3 silenciada ou reduzida.

Apenas para uso em investigação. Não se destina a uso diagnóstico ou terapêutico.