TR2 CRISPR/Cas9 KOプラスミド (m): sc-423489

概要

マウスNr2c1は、オーファン核内受容体TR2をコードしており、ホルモン応答配列に配列特異的に結合して、細胞運命決定に関与する遺伝子発現プログラムを調節する転写因子です。TR2は核内受容体シグナル伝達および転写コレギュレーターのネットワークに関与し、分化・増殖・代謝恒常性に影響を及ぼします。特に、生殖細胞の発生や、多能性に関連する制御回路における重要な役割が報告されています。これらの転写機能を介してNR2C1はクロマチン状態や系譜コミットメント経路に影響し得ますが、これらの経路は発生異常やがんに関連した転写制御の破綻でしばしば攪乱されます。そのため、Nr2c1は、マウスモデルにおいて幹細胞様状態や組織特異的分化の基盤となる遺伝子制御機構を解析するうえで有用な標的です。

TR2 CRISPR/Cas9 KOプラスミド（m）は、mouse細胞株におけるNr2c1遺伝子の標的破壊を目的として設計されたプラスミドのプールである。各プラスミドは、Nr2c1内の異なる部位を標的とする固有のシングルガイドRNA（sgRNA）と、Streptococcus pyogenes由来のCas9ヌクレアーゼを共発現します。また、これらのプラスミドはGFPをコードしており、蛍光顕微鏡やフローサイトメトリーを用いて、トランスフェクションに成功した細胞を蛍光で識別・濃縮することが可能です。

このマルチガイド設計により、Cas9による二本鎖切断の形成後に、Nr2c1のオープンリーディングフレームを破壊する挿入または欠失（インデル）が生じる可能性が高まります。CRISPR/Cas9システムによって導入されたDNA切断は、内因性の非相同末端結合（NHEJ）経路を通じて修復され、その結果、TR2タンパク質の発現を阻害するフレームシフト変異が生じることが頻繁にあります。

このCRISPRノックアウトシステムにより、TR2シグナル伝達、機能ゲノミクス研究、がん生物学研究、およびヒト細胞株における治療反応の評価を目的とした、Nr2c1欠損細胞モデルの効率的な作製が可能となる。

主な特徴

• TR2の機能に不可欠なNr2c1エクソンを標的とするsgRNA
  導入を簡素化するための、単一プラスミドからのSpCas9およびsgRNAの共発現
  トランスフェクトされた細胞を識別するためのGFPレポーター
  ノックアウト効率を向上させるための、Nr2c1ゲノム上の複数の部位を標的とするプラスミドのプール
  トランスフェクションによる導入に対応

設計バリエーション

CRISPRs +/- HDR

• TR2 CRISPR/Cas9 KOプラスミド（m）およびTR2 CRISPR/Cas9 KOプラスミド（m2）によってコードされるgRNAは、Nr2c1遺伝子座内の異なる部位を標的としています。いずれか一方、または両方の標的設計が利用可能な場合があります。入手可能性については「関連製品」を参照してください。
  TR2 HDRプラスミド（m）および TR2 HDRプラスミド（m2）によってコードされるHDRドナー構築体は、プロマイシン耐性カセットとRFPレポーターを含み、これらはNr2c1ホモロジーアームに挟まれており、CRISPR/Cas9 KO設計に対応する特定のNr2c1標的部位でのホモロジー依存修復をサポートします。HDRドナーの入手可能性は異なる場合があります。入手可能性については「関連製品」をご確認ください。

研究用のみ。診断用または治療用ではありません。