TR2 Plasmídeo de ativação de CRISPR (h): sc-403818-ACT

O NR2C1 humano codifica o TR2, um recetor nuclear órfão que atua como um fator de transcrição específico de sequência, regulando programas de expressão génica ligados ao destino celular, ao metabolismo e à sinalização endócrina. O TR2 liga-se a elementos de resposta de recetores nucleares e interage com correaguladores para modular redes de transcrição envolvidas na diferenciação, na biologia reprodutiva e em processos de desenvolvimento. Em vias celulares, a atividade do TR2 pode influenciar o estado da cromatina e a homeostase transcricional, moldando decisões de linhagem e a expressão génica responsiva ao stress. A expressão ou sinalização desregulada de NR2C1/TR2 tem sido associada na literatura a estados de diferenciação alterados e a programas de transcrição relevantes para o cancro, sustentando a sua utilização como um nó mecanístico em estudos de regulação génica.

TR2 O Plasmídeo de Ativação CRISPR (h) oferece uma abordagem direcionada e não destrutiva para regular positivamente a expressão endógena de NR2C1 sem alterar a sequência de ADN subjacente.

TR2 O Plasmídeo de Ativação CRISPR (h) é um sistema mediador de ativação sinérgica (SAM) de três plasmídeos, concebido para a regulação positiva transcricional altamente eficiente e específica do locus NR2C1 em linhas celulares humanas. O sistema é construído em torno de uma Cas9 cataliticamente inativa (dCas9) portadora de duas mutações inativadoras (D10A e N863A) que eliminam a atividade nuclease, preservando simultaneamente a ligação ao ADN. Esta dCas9 é fundida com VP64, um potente ativador transcricional, e é coexpressa com um gene de resistência à blasticidina para seleção. O segundo plasmídeo codifica a proteína de fusão MS2-p65-HSF1, um complexo ativador secundário que atua em conjunto com o dCas9-VP64, juntamente com um gene de resistência à higromicina. O terceiro plasmídeo codifica um sgRNA de 20 nt específico para o alvo, fundido a dois aptâmeros de RNA MS2 que recrutam o complexo MS2-p65-HSF1 para o local de ativação, acompanhado por um gene de resistência à puromicina. Os três plasmídeos são administrados numa proporção de massa de 1:1:1 para uma expressão equilibrada de todos os componentes do sistema.

Uma vez montado no locus alvo, o complexo SAM liga-se a cerca de 200 pb a montante do local de início da transcrição NR2C1, onde VP64, p65 e HSF1 atuam em conjunto para recrutar a maquinaria transcricional e impulsionar a regulação positiva da expressão endógena de TR2. Ao contrário da Cas9 com atividade nuclease, o dCas9 não introduz quebras de cadeia dupla nem modifica a sequência genómica, preservando o locus NR2C1 nativo e permitindo o estudo de respostas transcricionais dependentes de TR2 no locus endógeno, tornando-o uma ferramenta valiosa para estudos funcionais, identificação de genes-alvo e modelagem da restauração da via TR2 em células tumorais com expressão de NR2C1 silenciada ou reduzida.

Apenas para uso em investigação. Não se destina a uso diagnóstico ou terapêutico.