TorsinA Plasmide KO CRISPR/Cas9 (m): sc-424414

Panoramica

Tor1a codifica torsinA, un’ATPasi AAA+ localizzata nel reticolo endoplasmatico e nell’involucro nucleare, dove contribuisce all’integrità dell’involucro nucleare, alla proteostasi e al rimodellamento associato alle membrane attraverso interazioni con LAP1 e LULL1. Nelle cellule murine, l’attività di torsinA è collegata alla regolazione del trasporto nucleo-citoplasmatico, delle risposte allo stress del reticolo endoplasmatico e del controllo qualità delle proteine mal ripiegate. L’alterazione della funzione di TOR1A è associata a disfunzione neuronale e a fenotipi correlati alla distonia, rendendolo rilevante per studi sulla biologia dei circuiti motori e sull’adattamento cellulare allo stress. Tor1a è utilizzato anche come locus modello per indagare come le perturbazioni dell’involucro nucleare influenzino l’accoppiamento con il citoscheletro e il traffico intracellulare.

Il plasmide CRISPR/Cas9 KO TorsinA (m) è un pool di plasmidi progettato per la distruzione mirata del gene Tor1a in linee cellulari mouse. Ciascun plasmide co-esprime un singolo RNA guida (sgRNA) unico che prende di mira un sito distinto all'interno del Tor1a insieme alla nucleasi Cas9 di Streptococcus pyogenes. I plasmidi codificano anche per la GFP, consentendo l'identificazione fluorescente e l'arricchimento delle cellule trasfettate con successo tramite microscopia a fluorescenza o citometria a flusso.

Il design multi-guida aumenta la probabilità di generare inserzioni o delezioni (indels) che interrompono il frame di lettura aperto Tor1a a seguito della formazione di rotture a doppio filamento mediate da Cas9. Le rotture del DNA introdotte dal sistema CRISPR/Cas9 vengono riparate attraverso vie endogene di giunzione non omologa (NHEJ), che spesso provocano mutazioni con spostamento del frame che annullano l'espressione della proteina TorsinA.

Questo sistema di knockout CRISPR consente la generazione efficiente di modelli cellulari carenti di Tor1a per lo studio della segnalazione di TorsinA, studi di genomica funzionale, ricerca sulla biologia del cancro e valutazione delle risposte terapeutiche in linee cellulari umane.

Caratteristiche principali

• sgRNA mirati agli esoni Tor1a critici per la funzione di TorsinA
  Co-espressione di SpCas9 e sgRNA da un singolo plasmide per una somministrazione semplificata
  Reporter GFP per l'identificazione delle cellule trasfettate
  Pool di plasmidi mirati a più siti genomici di Tor1a per migliorare l'efficienza del knockout
  Compatibile con la somministrazione tramite trasfezione

Varianti di progettazione

CRISPR +/- HDR

• Gli gRNA codificati dal TorsinA CRISPR/Cas9 KO Plasmid (m) e dal TorsinA CRISPR/Cas9 KO Plasmid (m2) prendono di mira siti distinti all'interno del locus Tor1a. Potrebbe essere disponibile uno o entrambi i design di targeting. Vedere Prodotti correlati per la disponibilità.
  I costrutti donatori HDR codificati dal TorsinA Plasmide HDR (m) e il plasmide HDR TorsinA (m2) contengono una cassetta di resistenza alla puromicina e un reporter RFP affiancato da bracci di omologia Tor1a per supportare la riparazione diretta dall'omologia in siti bersaglio Tor1a definiti corrispondenti ai disegni CRISPR/Cas9 KO. La disponibilità dei donatori HDR può variare. Vedere Prodotti correlati per la disponibilità.

Solo per uso di ricerca. Non destinato a uso diagnostico o terapeutico.