Tom1 Plasmide Double Nickase (m): sc-423467-NIC

Il gene murino Tom1 (target di Myb1) codifica una proteina adattatrice endosomiale che lega l’ubiquitina e recluta macchinari associati all’ESCRT per regolare il traffico e lo smistamento di proteine di membrana ubiquitinate. Attraverso interazioni con la clatrina e con componenti endosomiali, TOM1 contribuisce alla maturazione degli endosomi, alla degradazione del carico e al controllo del turnover dei recettori, influenzando così l’ampiezza e la durata della segnalazione. TOM1 è stato inoltre collegato alla modulazione di vie di segnalazione infiammatorie, inclusa la regolazione dell’asse IL-1/TLR tramite il traffico di complessi di segnalazione. Un trasporto endolisosomiale deregolato e un’alterazione della segnalazione dell’immunità innata sono aspetti rilevanti nei meccanismi di malattie neurodegenerative e immuno-mediate, rendendo Tom1 un locus utile per dissezionare le vie di segnalazione in modelli cellulari.

Tom1 Il plasmide Double Nickase (m) consiste in una coppia di plasmidi ingegnerizzati per l'editing ad alta specificità del locus Tom1 nelle linee cellulari mouse. Ciascun plasmide esprime una nickasi Cas9 D10A e un sgRNA distinto che prende di mira filamenti di DNA opposti all'interno di Tom1. Quando indirizzate verso siti adiacenti su filamenti di DNA opposti, le due nickasi generano tagli a filamento singolo sfalsati che insieme producono una rottura a doppio filamento sfalsata, richiedendo un'attività coordinata sul bersaglio da entrambe le guide. La rottura del DNA risultante viene risolta da vie di riparazione cellulare endogene, più comunemente attraverso la giunzione non omologa delle estremità (NHEJ), portando a inserzioni o delezioni che interrompono la funzione di Tom1. Richiedendo il coinvolgimento di due sgRNA nel locus bersaglio, l'approccio a doppia nickasi migliora la specificità dell'editing e fornisce una strategia CRISPR complementare per applicazioni in cui è desiderato un controllo aggiuntivo sulla precisione del targeting.

Per supportare l'identificazione efficiente delle cellule modificate, un plasmide codifica la GFP per la visualizzazione fluorescente delle popolazioni trasfettate, mentre il plasmide di accompagnamento porta un gene di resistenza alla puromicina per la selezione antibiotica. Insieme, queste caratteristiche supportano l'arricchimento efficiente delle popolazioni co-trasfettate e semplificano la convalida dei cloni con Tom1 interrotto.

Solo per uso di ricerca. Non destinato a uso diagnostico o terapeutico.