Particules Lentivirales d'Activation (h) TNIK: sc-401523-LAC

La TNIK humaine (TRAF2 and NCK-interacting kinase) est une kinase sérine/thréonine qui intègre des signaux provenant de petites GTPases et de protéines adaptatrices afin de réguler la dynamique du cytosquelette, le trafic vésiculaire et les programmes transcriptionnels. TNIK joue des rôles bien caractérisés dans la signalisation Wnt/β-caténine, notamment via la modulation de la transcription dépendante de TCF/LEF, et elle contribue à des voies contrôlant la polarité cellulaire, la migration et le développement neuronal. Dans des contextes immunitaires et épithéliaux, TNIK peut s’articuler avec des réseaux de signalisation du stress et de l’inflammation grâce à des interactions protéine–protéine et à son activité kinase. Une expression ou une signalisation de TNIK dérégulée a été associée à des états oncogéniques de la voie Wnt ainsi qu’à des phénotypes neurodéveloppementaux, ce qui en fait un nœud utile pour des études mécanistiques du contrôle des voies et du comportement cellulaire.

Les particules d'activation lentivirales TNIK (h) répondent à ce besoin en encapsulant le système complet d'activation transcriptionnelle SAM (Synergistic Activation Mediator) dans des particules lentivirales à titre élevé prêtes à la transduction, permettant une régulation à la hausse efficace de TNIK dans un plus large éventail de types de cellules humaines.

Les particules d'activation lentivirales TNIK (h) délivrent tous les composants fonctionnels du système médiateur d'activation synergique (SAM) via la transduction lentivirale. Le système comprend trois préparations de particules co-transduites dans les cellules cibles : l'une codant pour une dCas9 catalytiquement inactive (mutations D10A et N863A) fusionnée au domaine de transactivation VP64 avec un gène de résistance à la blasticidine ; une codant pour la protéine de fusion MS2-p65-HSF1 avec un gène de résistance à l'hygromycine ; et une codant pour un ARNsg de 20 nt spécifique de la cible, fusionné à deux aptamères d'ARN MS2 avec un gène de résistance à la puromycine. Après transduction lentivirale et intégration génomique des cassettes d'expression, les composants du SAM sont exprimés de manière stable et s'assemblent au locus cible dans la région promotrice proximale en amont du site de départ de la transcription TNIK, où VP64, p65 et HSF1 agissent de manière coopérative pour recruter l'appareil transcriptionnel endogène et induire une régulation à la hausse soutenue de l'expression endogène de TNIK. L'utilisation de dCas9 inactif sur les nucléases évite l'introduction de cassures double brin de l'ADN et préserve le locus génomique natif TNIK ainsi que l'architecture régulatrice.

Le format lentiviral offre plusieurs avantages pratiques : l'intégration génomique stable permet une activation héréditaire au fil des divisions cellulaires ; les préparations de particules à titre élevé éliminent le besoin d'une production virale en interne ; et la compatibilité avec les types de cellules primaires, non divisibles et résistantes à la transfection élargit l'accessibilité expérimentale. Le succès de la transduction peut être confirmé et renforcé par une triple sélection antibiotique utilisant la puromycine, l'hygromycine et la blasticidine.

Réservé à la recherche. N'est pas destiné à un usage diagnostique ou thérapeutique.