TNF-R2 CRISPR Activationプラスミド (h): sc-400709-ACT

TNFRSF1Bは腫瘍壊死因子受容体2（TNF-R2）をコードしており、免疫系および内皮系の細胞系列で優先的に発現するTNF受容体ファミリーの一員です。TNF-R2は膜結合型TNFによって活性化されます。TNF-R2のシグナル伝達はTRAFアダプターを介してカノニカルおよびノンカノニカルNF-κB、MAPK、PI3K/AKT経路を調節し、細胞の生存、増殖、炎症性サイトカイン産生プログラムを形作ります。免疫調節機能に加え、TNF-R2はアポトーシスやストレス応答ネットワークとのクロストークを通じて、組織リモデリングや血管新生応答にも影響します。TNFRSF1B活性の制御異常は、炎症性疾患や自己免疫疾患、血管病変、腫瘍—免疫微小環境の生物学と関連づけられており、免疫恒常性や慢性炎症の機序研究において重要です。

TNF-R2 CRISPR活性化プラスミド（h）は、基盤となるDNA配列を変更することなく、内因性TNFRSF1Bの発現を標的化し、非破壊的にアップレギュレートするアプローチを提供します。

TNF-R2 CRISPR 活性化プラスミド (h) は、ヒト細胞株における TNFRSF1B 遺伝子座の高効率かつ部位特異的な転写アップレギュレーションのために設計された、3 つのプラスミドからなる相乗的活性化メディエーター (SAM) システムです。このシステムは、DNA結合能を維持しつつヌクレアーゼ活性を失わせる2つの不活性化変異（D10AおよびN863A）を有する、触媒活性のないCas9（dCas9）を中核としています。このdCas9は、強力な転写活性化因子であるVP64と融合しており、選別用のブラスティシジン耐性遺伝子と共に共発現します。2番目のプラスミドは、dCas9-VP64と協調して機能する二次活性化複合体であるMS2-p65-HSF1融合タンパク質をコードしており、ヒグロマイシン耐性遺伝子と共に発現する。3番目のプラスミドは、標的特異的な20塩基対のsgRNAをコードしており、これはMS2-p65-HSF1複合体を活性化部位に誘導する2つのMS2 RNAアプタマーと融合しており、さらにピューロマイシン耐性遺伝子が付随している。これら3つのプラスミドは、システム構成要素すべてが均等に発現するよう、質量比1:1:1で導入される。

標的遺伝子座に集合すると、SAM複合体はTNFRSF1B転写開始点の上流約200 bpの領域に結合し、そこでVP64、p65、およびHSF1が協調して転写装置を動員し、内因性TNF-R2の発現上昇を促進する。ヌクレアーゼ活性を持つCas9とは異なり、 dCas9は二本鎖切断を導入したりゲノム配列を改変したりしないため、天然のTNFRSF1B遺伝子座が保持され、内因性遺伝子座におけるTNF-R2依存性の転写応答の研究が可能となります。これにより、機能解析、標的遺伝子の同定、およびTNFRSF1B発現が沈黙または低下した腫瘍細胞におけるTNF-R2経路の回復のモデル化を行う上で、貴重なツールとなります。

研究用のみ。診断用または治療用ではありません。