TMEM92 Double Nickase Plasmid (h): sc-407271-NIC
- Zielspezies: human
- 20 µg transfektionsfertige, aufgereinigte Plasmid DNA; geeignet für 20 Transfektionen
- Das TMEM92 Double Nickase Plasmid (h) wird als Plasmid-Paar geliefert. Die einzelnen Plasmide kodieren für eine D10A mutierte Cas9 Nuklease sowie für je eine unterschiedliche, zielspezifische 20nt guide RNA (gRNA) Sequenz. Dies erlaubt eine hohe Knockout-Effizienz bei gleichzeitig größerer Spezifität als das entsprechende CRISPR/Cas9 KO Plasmid
- gRNA Sequenzpaare liegen ca. 20 bp auseinander um ein spezifisches Cas9-vermitteltes "Double Nicking" der genomischen DNA zu erlauben und so im Resultat den Effekt eines Doppelstrangbruchs nachzuahmen.
- Ein Plasmid kodiert für ein Puromycin-Resistenzgen zur Selektion von stabilen Knockout-Zellen. Das andere Plasmid kodiert für ein GFP-Gen für den visuellen Nachweis der Transfektion
- TMEM92 Double-Nickase-Plasmid (h) und TMEM92 Double-Nickase-Plasmid (h2) kodieren unterschiedliche gepaarte gRNA-Designs, die auf TMEM92 abzielen. Möglicherweise ist eines oder sind beide Designs verfügbar
Bestellinformation
| Produkt | Katalog # | EINHEIT | Preis | ANZAHL | Favoriten | |
TMEM92 Double Nickase Plasmid (h) | sc-407271-NIC | 20 µg | $410.00 | |||
TMEM92 Double Nickase Plasmid (h2) | sc-407271-NIC-2 | 20 µg | $410.00 |
TMEM92 kodiert ein vermutlich multipassiges Transmembranprotein, das bislang nur begrenzt funktionell annotiert ist und vermutlich an zellulären Membranen lokalisiert, wo es zur Membranorganisation, zum vesikulären Transport (Trafficking) oder zur Signaltransduktion beitragen könnte. Wie andere Mitglieder der TMEM-Familie ist TMEM92 von Interesse, um besser zu verstehen, wie in Membranen verankerte Proteine die Kommunikation zwischen Organellen und die zelluläre Homöostase beeinflussen. Veränderungen auf Transkriptebene bei wenig charakterisierten Transmembrangenes werden in vielen Krankheitsdatensätzen häufig beobachtet, darunter Krebs- sowie immunbezogene Erkrankungen, was mechanistische Studien zu TMEM92 in relevanten Zellmodellen motiviert. Die funktionelle Untersuchung von TMEM92 kann helfen, seine Rollen bei Zellwachstum, Stressantworten und dem Crosstalk von Signalwegen zu klären, die von membranlokalisierten Proteinnetzwerken abhängen.
TMEM92 Das Double-Nickase-Plasmid (h) besteht aus einem aufeinander abgestimmten Plasmidpaar, das für die hochspezifische Bearbeitung des TMEM92-Lokus in human-Zelllinien entwickelt wurde. Jedes Plasmid exprimiert eine Cas9-D10A-Nickase und eine spezifische sgRNA, die auf entgegengesetzte DNA-Stränge innerhalb von TMEM92 abzielt. Wenn sie auf benachbarte Stellen auf entgegengesetzten DNA-Strängen gerichtet sind, erzeugen die beiden Nickasen versetzte Einzelstrang-Schnitte, die zusammen einen versetzten Doppelstrangbruch erzeugen, was eine koordinierte On-Target-Aktivität beider Guides erfordert. Der resultierende DNA-Bruch wird durch endogene zelluläre Reparaturwege behoben, meist durch nicht-homologe Endverknüpfung (NHEJ), was zu Insertionen oder Deletionen führt, die die TMEM92-Funktion stören. Durch die Notwendigkeit einer doppelten sgRNA-Bindung am Zielort erhöht der Doppel-Nick-Ansatz die Spezifität der Bearbeitung und bietet eine komplementäre CRISPR-Strategie für Anwendungen, bei denen eine zusätzliche Kontrolle über die Zielgenauigkeit gewünscht ist.
Um eine effiziente Identifizierung editierter Zellen zu unterstützen, kodiert ein Plasmid GFP zur fluoreszierenden Visualisierung transfizierter Populationen, während das Begleitplasmid ein Puromycin-Resistenzgen für die Antibiotika-Selektion trägt. Zusammen unterstützen diese Merkmale eine effiziente Anreicherung co-transfizierter Populationen und vereinfachen die Validierung von Klonen mit TMEM92-Störung.
Nur für Forschungszwecke. Nicht für diagnostische oder therapeutische Zwecke bestimmt.