TMEM88 CRISPR/Cas9 KOプラスミド (h): sc-405789

概要

TMEM88は小型の膜貫通タンパク質をコードしており、Dishevelled（Dvl）依存性のシグナル伝達を調節することでWntシグナルの制御に関与し、β-カテニンによって駆動される転写プログラムに影響を及ぼします。経路出力への作用を通じて、TMEM88は増殖、分化、極性、上皮間葉転換（EMT）などの細胞プロセスを形作り得ます。TMEM88の発現変化や経路コンテキストの違いは、がんや組織リモデリングを含む複数の疾患関連の状況において、Wnt活性の制御破綻と関連付けられています。ヒトのモデル系では、TMEM88の摂動は、Wnt経路の振幅と下流の遺伝子発現ネットワークを調整する膜近傍の制御点を検証するために用いられます。

TMEM88 CRISPR/Cas9 KOプラスミド（h）は、human細胞株におけるTMEM88遺伝子の標的破壊を目的として設計されたプラスミドのプールである。各プラスミドは、TMEM88内の異なる部位を標的とする固有のシングルガイドRNA（sgRNA）と、Streptococcus pyogenes由来のCas9ヌクレアーゼを共発現します。また、これらのプラスミドはGFPをコードしており、蛍光顕微鏡やフローサイトメトリーを用いて、トランスフェクションに成功した細胞を蛍光で識別・濃縮することが可能です。

このマルチガイド設計により、Cas9による二本鎖切断の形成後に、TMEM88のオープンリーディングフレームを破壊する挿入または欠失（インデル）が生じる可能性が高まります。CRISPR/Cas9システムによって導入されたDNA切断は、内因性の非相同末端結合（NHEJ）経路を通じて修復され、その結果、TMEM88タンパク質の発現を阻害するフレームシフト変異が生じることが頻繁にあります。

このCRISPRノックアウトシステムにより、TMEM88シグナル伝達、機能ゲノミクス研究、がん生物学研究、およびヒト細胞株における治療反応の評価を目的とした、TMEM88欠損細胞モデルの効率的な作製が可能となる。

主な特徴

• TMEM88の機能に不可欠なTMEM88エクソンを標的とするsgRNA
  導入を簡素化するための、単一プラスミドからのSpCas9およびsgRNAの共発現
  トランスフェクトされた細胞を識別するためのGFPレポーター
  ノックアウト効率を向上させるための、TMEM88ゲノム上の複数の部位を標的とするプラスミドのプール
  トランスフェクションによる導入に対応

設計バリエーション

CRISPRs +/- HDR

• TMEM88 CRISPR/Cas9 KOプラスミド（h）およびTMEM88 CRISPR/Cas9 KOプラスミド（h2）によってコードされるgRNAは、TMEM88遺伝子座内の異なる部位を標的としています。いずれか一方、または両方の標的設計が利用可能な場合があります。入手可能性については「関連製品」を参照してください。
  TMEM88 HDRプラスミド（h）および TMEM88 HDRプラスミド（h2）によってコードされるHDRドナー構築体は、プロマイシン耐性カセットとRFPレポーターを含み、これらはTMEM88ホモロジーアームに挟まれており、CRISPR/Cas9 KO設計に対応する特定のTMEM88標的部位でのホモロジー依存修復をサポートします。HDRドナーの入手可能性は異なる場合があります。入手可能性については「関連製品」をご確認ください。

研究用のみ。診断用または治療用ではありません。