TMEM65 Plasmídeo CRISPR/Cas9 KO (h): sc-406584

Visão geral

TMEM65 codifica a proteína transmembranar 65, uma proteína de membrana associada às mitocôndrias implicada na manutenção da organização da membrana interna mitocondrial e no suporte à fosforilação oxidativa. TMEM65 tem sido associado à bioenergética mitocondrial, à regulação do potencial de membrana e às respostas celulares ao estresse metabólico, influenciando assim a produção de ATP e a homeostase de espécies reativas de oxigênio. Alterações na função de TMEM65 foram associadas a fenótipos de disfunção mitocondrial e são relevantes para estudos em tecidos de alta demanda energética, nos quais a respiração comprometida pode contribuir para mecanismos de doenças neuromusculares e cardiometabólicas. Como componente de vias mitocondriais, TMEM65 é útil para investigar sinalização mitocondrial, controle de qualidade de organelas e programas transcricionais adaptativos ao estresse.

O Plasmídeo CRISPR/Cas9 KO TMEM65 (h) é um conjunto de plasmídeos concebido para a interrupção direcionada do gene TMEM65 em linhas celulares human. Cada plasmídeo coexpressa um RNA guia único (sgRNA) direcionado a um local distinto dentro do TMEM65, juntamente com a nuclease Cas9 de Streptococcus pyogenes. Os plasmídeos também codificam GFP, permitindo a identificação fluorescente e o enriquecimento de células transfectadas com sucesso por microscopia de fluorescência ou citometria de fluxo.

O design multiguia aumenta a probabilidade de gerar inserções ou deleções (indels) que interrompem o quadro de leitura aberto do TMEM65 na sequência da formação de quebras de cadeia dupla mediadas por Cas9. As quebras de ADN introduzidas pelo sistema CRISPR/Cas9 são reparadas através de vias endógenas de junção de extremidades não homólogas (NHEJ), resultando frequentemente em mutações de deslocamento de quadro que abolir a expressão da proteína TMEM65.

Este sistema de knockout CRISPR permite a geração eficiente de modelos celulares com deficiência de TMEM65 para a investigação da sinalização de TMEM65, estudos de genómica funcional, investigação em biologia do cancro e avaliação de respostas terapêuticas em linhas celulares humanas.

Características principais

• sgRNAs direcionados para o(s) exão(ões) TMEM65 críticos para a função TMEM65
  Coexpressão de SpCas9 e sgRNA a partir de um único plasmídeo para simplificar a administração
  Repórter GFP para identificação de células transfectadas
  Conjunto de plasmídeos direcionados para múltiplos locais genómicos TMEM65 para melhorar a eficiência do knockout
  Compatível com administração por transfecção

Variantes de Design

CRISPRs +/- HDRs

• Os gRNAs codificados pelo TMEM65 Plasmídeo CRISPR/Cas9 KO (h) e pelo TMEM65 Plasmídeo CRISPR/Cas9 KO (h2) têm como alvo locais distintos dentro do locus TMEM65. Pode estar disponível um ou ambos os designs de alvo. Consulte Produtos Relacionados para verificar a disponibilidade.
  As construções doadoras HDR codificadas pelo TMEM65 Plasmídeo HDR (h) e o Plasmídeo HDR TMEM65 (h2) contêm uma cassete de resistência à puromicina e um repórter RFP flanqueado por braços de homologia TMEM65 para suportar a reparação dirigida por homologia em locais-alvo TMEM65 definidos, correspondentes aos desenhos de KO CRISPR/Cas9. A disponibilidade do doador HDR pode variar. Consulte Produtos Relacionados para verificar a disponibilidade.

Apenas para uso em investigação. Não se destina a uso diagnóstico ou terapêutico.