TMEM63B Plasmídeo CRISPR/Cas9 KO (h): sc-412530

Visão geral

TMEM63B codifica a proteína transmembranar 63B, uma proteína de membrana multipasse implicada na sinalização mecanossensível e osmorregulatória por meio de atividade de canal permeável a íons. Ela contribui para a homeostase celular ao conectar alterações na tensão da membrana e no volume celular a processos a jusante dependentes de Ca²⁺, influenciando a excitabilidade neuronal, a dinâmica do citoesqueleto e vias de resposta ao estresse. A expressão de TMEM63B é enriquecida no sistema nervoso e tem sido associada a fenótipos do neurodesenvolvimento e neuropsiquiátricos, tornando-a relevante para estudos de função sináptica e transdução sensorial. Alterações na atividade de TMEM63B também têm sido exploradas no contexto de migração celular e tráfego de membranas, sustentando papéis mais amplos em redes de sinalização específicas de tecidos.

O Plasmídeo CRISPR/Cas9 KO TMEM63B (h) é um conjunto de plasmídeos concebido para a interrupção direcionada do gene TMEM63B em linhas celulares human. Cada plasmídeo coexpressa um RNA guia único (sgRNA) direcionado a um local distinto dentro do TMEM63B, juntamente com a nuclease Cas9 de Streptococcus pyogenes. Os plasmídeos também codificam GFP, permitindo a identificação fluorescente e o enriquecimento de células transfectadas com sucesso por microscopia de fluorescência ou citometria de fluxo.

O design multiguia aumenta a probabilidade de gerar inserções ou deleções (indels) que interrompem o quadro de leitura aberto do TMEM63B na sequência da formação de quebras de cadeia dupla mediadas por Cas9. As quebras de ADN introduzidas pelo sistema CRISPR/Cas9 são reparadas através de vias endógenas de junção de extremidades não homólogas (NHEJ), resultando frequentemente em mutações de deslocamento de quadro que abolir a expressão da proteína TMEM63B.

Este sistema de knockout CRISPR permite a geração eficiente de modelos celulares com deficiência de TMEM63B para a investigação da sinalização de TMEM63B, estudos de genómica funcional, investigação em biologia do cancro e avaliação de respostas terapêuticas em linhas celulares humanas.

Características principais

• sgRNAs direcionados para o(s) exão(ões) TMEM63B críticos para a função TMEM63B
  Coexpressão de SpCas9 e sgRNA a partir de um único plasmídeo para simplificar a administração
  Repórter GFP para identificação de células transfectadas
  Conjunto de plasmídeos direcionados para múltiplos locais genómicos TMEM63B para melhorar a eficiência do knockout
  Compatível com administração por transfecção

Variantes de Design

CRISPRs +/- HDRs

• Os gRNAs codificados pelo TMEM63B Plasmídeo CRISPR/Cas9 KO (h) e pelo TMEM63B Plasmídeo CRISPR/Cas9 KO (h2) têm como alvo locais distintos dentro do locus TMEM63B. Pode estar disponível um ou ambos os designs de alvo. Consulte Produtos Relacionados para verificar a disponibilidade.
  As construções doadoras HDR codificadas pelo TMEM63B Plasmídeo HDR (h) e o Plasmídeo HDR TMEM63B (h2) contêm uma cassete de resistência à puromicina e um repórter RFP flanqueado por braços de homologia TMEM63B para suportar a reparação dirigida por homologia em locais-alvo TMEM63B definidos, correspondentes aos desenhos de KO CRISPR/Cas9. A disponibilidade do doador HDR pode variar. Consulte Produtos Relacionados para verificar a disponibilidade.

Apenas para uso em investigação. Não se destina a uso diagnóstico ou terapêutico.