Plasmide CRISPR d'Activation (m2) TMEM214: sc-427183-ACT-2

Le gène murin Tmem214 code TMEM214, une protéine transmembranaire associée au réticulum endoplasmique, impliquée dans la régulation de l’apoptose et de la signalisation du stress du RE. TMEM214 a été associée à la modulation de la réponse aux protéines mal repliées (unfolded protein response) et de l’homéostasie du Ca2+, influençant les décisions de survie cellulaire en situation de stress protéotoxique et de perturbations de la fonction du RE. La dérégulation du stress du RE et des voies apoptotiques est pertinente pour des mécanismes étudiés dans la neurodégénérescence, les dysfonctionnements métaboliques et la biologie du cancer, ce qui fait de Tmem214 une cible utile pour la dissection de ces voies. L’édition génétique de Tmem214 dans des cellules murines ou dans des modèles in vivo permet d’interroger fonctionnellement la communication croisée entre stress du RE et apoptose, les programmes transcriptionnels en aval et les phénotypes d’adaptation au stress dans la recherche biomédicale.

TMEM214 Le plasmide d'activation CRISPR (m2) offre une approche ciblée et non destructive pour réguler à la hausse l'expression endogène de Tmem214 sans modifier la séquence d'ADN sous-jacente.

TMEM214 Le plasmide d'activation CRISPR (m2) est un système SAM (synergistic activation mediator) à trois plasmides conçu pour une régulation à la hausse hautement efficace et spécifique du locus Tmem214 dans des lignées cellulaires humaines. Le système s'articule autour d'une Cas9 catalytiquement inactive (dCas9) portant deux mutations inactivantes (D10A et N863A) qui éliminent l'activité nucléase tout en préservant la liaison à l'ADN. Cette dCas9 est fusionnée à VP64, un puissant activateur transcriptionnel, et est co-exprimée avec un gène de résistance à la blasticidine pour la sélection. Le deuxième plasmide code pour la protéine de fusion MS2-p65-HSF1, un complexe activateur secondaire qui agit de concert avec dCas9-VP64, ainsi qu'un gène de résistance à l'hygromycine. Le troisième plasmide code pour un ARN guide (sgRNA) de 20 nt spécifique de la cible, fusionné à deux aptamères d'ARN MS2 qui recrutent le complexe MS2-p65-HSF1 vers le site d'activation, accompagné d'un gène de résistance à la puromycine. Les trois plasmides sont délivrés dans un rapport massique de 1:1:1 pour une expression équilibrée de tous les composants du système.

Une fois assemblé au locus cible, le complexe SAM se lie à environ 200 pb en amont du site de départ de la transcription Tmem214, où VP64, p65 et HSF1 agissent de concert pour recruter la machinerie transcriptionnelle et induire une régulation à la hausse de l'expression endogène de TMEM214. Contrairement à Cas9, qui possède une activité nucléase, dCas9 n'introduit pas de cassures double brin ni ne modifie la séquence génomique, préservant ainsi le locus Tmem214 natif et permettant l'étude des réponses transcriptionnelles dépendantes de TMEM214 au niveau du locus endogène, ce qui en fait un outil précieux pour les études fonctionnelles, l'identification de gènes cibles et la modélisation de la restauration de la voie TMEM214 dans les cellules tumorales présentant une expression de Tmem214 silencée ou réduite.

Réservé à la recherche. N'est pas destiné à un usage diagnostique ou thérapeutique.