TM4SF1 Plasmídeo de ativação de CRISPR (h): sc-404779-ACT

TM4SF1 (membro 1 da família transmembrana 4 L seis) é uma glicoproteína de superfície celular semelhante às tetraspaninas, enriquecida em contextos endoteliais e epiteliais, e implicada na regulação da adesão celular, motilidade e remodelamento do citoesqueleto. Ela organiza microdomínios de membrana e modula a saída de sinalização de integrinas e receptores tirosina-quinase, influenciando vias ligadas à migração, interação com a matriz extracelular e programas angiogênicos. A expressão de TM4SF1 tem sido associada a fenótipos invasivos e remodelamento vascular em múltiplos contextos de doença, tornando-a um alvo útil para estudar mudanças no comportamento celular induzidas pelo microambiente. Como proteína de andaime de membrana, TM4SF1 é frequentemente investigada por sua contribuição para a comunicação célula–célula e célula–matriz e para respostas transcricionais a jusante.

TM4SF1 O Plasmídeo de Ativação CRISPR (h) oferece uma abordagem direcionada e não destrutiva para regular positivamente a expressão endógena de TM4SF1 sem alterar a sequência de ADN subjacente.

TM4SF1 O Plasmídeo de Ativação CRISPR (h) é um sistema mediador de ativação sinérgica (SAM) de três plasmídeos, concebido para a regulação positiva transcricional altamente eficiente e específica do locus TM4SF1 em linhas celulares humanas. O sistema é construído em torno de uma Cas9 cataliticamente inativa (dCas9) portadora de duas mutações inativadoras (D10A e N863A) que eliminam a atividade nuclease, preservando simultaneamente a ligação ao ADN. Esta dCas9 é fundida com VP64, um potente ativador transcricional, e é coexpressa com um gene de resistência à blasticidina para seleção. O segundo plasmídeo codifica a proteína de fusão MS2-p65-HSF1, um complexo ativador secundário que atua em conjunto com o dCas9-VP64, juntamente com um gene de resistência à higromicina. O terceiro plasmídeo codifica um sgRNA de 20 nt específico para o alvo, fundido a dois aptâmeros de RNA MS2 que recrutam o complexo MS2-p65-HSF1 para o local de ativação, acompanhado por um gene de resistência à puromicina. Os três plasmídeos são administrados numa proporção de massa de 1:1:1 para uma expressão equilibrada de todos os componentes do sistema.

Uma vez montado no locus alvo, o complexo SAM liga-se a cerca de 200 pb a montante do local de início da transcrição TM4SF1, onde VP64, p65 e HSF1 atuam em conjunto para recrutar a maquinaria transcricional e impulsionar a regulação positiva da expressão endógena de TM4SF1. Ao contrário da Cas9 com atividade nuclease, o dCas9 não introduz quebras de cadeia dupla nem modifica a sequência genómica, preservando o locus TM4SF1 nativo e permitindo o estudo de respostas transcricionais dependentes de TM4SF1 no locus endógeno, tornando-o uma ferramenta valiosa para estudos funcionais, identificação de genes-alvo e modelagem da restauração da via TM4SF1 em células tumorais com expressão de TM4SF1 silenciada ou reduzida.

Apenas para uso em investigação. Não se destina a uso diagnóstico ou terapêutico.