TM CRISPR Activationプラスミド (h): sc-400956-ACT

THBDはトロンボモジュリン（TM）をコードしており、TMは内皮細胞表面に存在する糖タンパク質です。TMはトロンビンに結合し、その基質特異性を変化させてプロテインCの活性化を促進することで、凝固制御と抗炎症性シグナル伝達を結び付けます。TMは、トロンビン介在性のプロテアーゼ活性化受容体（PAR）経路を調節し、フィブリン形成を抑制し、さらに内皮バリア機能や白血球接着応答を制御することで、血管の恒常性維持に関与します。THBDの発現や機能の変化は、止血機構の破綻や炎症性の血管表現型と関連しており、血栓症の感受性、敗血症関連凝固障害、内皮機能障害などの文脈で頻繁に研究されています。転写応答性の内皮マーカーとして、THBDはせん断応力、サイトカイン曝露、血管分化プログラムの指標（リードアウト）としても用いられます。

TM CRISPR活性化プラスミド（h）は、基盤となるDNA配列を変更することなく、内因性THBDの発現を標的化し、非破壊的にアップレギュレートするアプローチを提供します。

TM CRISPR 活性化プラスミド (h) は、ヒト細胞株における THBD 遺伝子座の高効率かつ部位特異的な転写アップレギュレーションのために設計された、3 つのプラスミドからなる相乗的活性化メディエーター (SAM) システムです。このシステムは、DNA結合能を維持しつつヌクレアーゼ活性を失わせる2つの不活性化変異（D10AおよびN863A）を有する、触媒活性のないCas9（dCas9）を中核としています。このdCas9は、強力な転写活性化因子であるVP64と融合しており、選別用のブラスティシジン耐性遺伝子と共に共発現します。2番目のプラスミドは、dCas9-VP64と協調して機能する二次活性化複合体であるMS2-p65-HSF1融合タンパク質をコードしており、ヒグロマイシン耐性遺伝子と共に発現する。3番目のプラスミドは、標的特異的な20塩基対のsgRNAをコードしており、これはMS2-p65-HSF1複合体を活性化部位に誘導する2つのMS2 RNAアプタマーと融合しており、さらにピューロマイシン耐性遺伝子が付随している。これら3つのプラスミドは、システム構成要素すべてが均等に発現するよう、質量比1:1:1で導入される。

標的遺伝子座に集合すると、SAM複合体はTHBD転写開始点の上流約200 bpの領域に結合し、そこでVP64、p65、およびHSF1が協調して転写装置を動員し、内因性TMの発現上昇を促進する。ヌクレアーゼ活性を持つCas9とは異なり、 dCas9は二本鎖切断を導入したりゲノム配列を改変したりしないため、天然のTHBD遺伝子座が保持され、内因性遺伝子座におけるTM依存性の転写応答の研究が可能となります。これにより、機能解析、標的遺伝子の同定、およびTHBD発現が沈黙または低下した腫瘍細胞におけるTM経路の回復のモデル化を行う上で、貴重なツールとなります。

研究用のみ。診断用または治療用ではありません。