TLR8 CRISPR Activationプラスミド (h): sc-401721-ACT

ヒトTLR8（Toll様受容体8）は、エンドソームに局在するパターン認識受容体であり、病原体や損傷細胞に由来するウリジンに富む一本鎖RNAを検知して自然免疫シグナルを開始します。活性化されると、TLR8はMyD88依存性のカスケードを介してNF-κBおよびIRFによる転写プログラムを駆動し、炎症性サイトカインやケモカインの発現を促進するとともに、抗原提示細胞の機能を調整します。TLR8活性は単球／マクロファージや樹状細胞の応答に影響し、抗微生物防御を統括するインターフェロン経路やインフラマソーム関連経路ともクロストークします。TLR8シグナルの破綻は異常な炎症状態や免疫介在性疾患の機序と関連づけられており、自然免疫制御や宿主—病原体相互作用を研究するうえで有用な標的（ノード）となっています。

TLR8 CRISPR活性化プラスミド（h）は、基盤となるDNA配列を変更することなく、内因性TLR8の発現を標的化し、非破壊的にアップレギュレートするアプローチを提供します。

TLR8 CRISPR 活性化プラスミド (h) は、ヒト細胞株における TLR8 遺伝子座の高効率かつ部位特異的な転写アップレギュレーションのために設計された、3 つのプラスミドからなる相乗的活性化メディエーター (SAM) システムです。このシステムは、DNA結合能を維持しつつヌクレアーゼ活性を失わせる2つの不活性化変異（D10AおよびN863A）を有する、触媒活性のないCas9（dCas9）を中核としています。このdCas9は、強力な転写活性化因子であるVP64と融合しており、選別用のブラスティシジン耐性遺伝子と共に共発現します。2番目のプラスミドは、dCas9-VP64と協調して機能する二次活性化複合体であるMS2-p65-HSF1融合タンパク質をコードしており、ヒグロマイシン耐性遺伝子と共に発現する。3番目のプラスミドは、標的特異的な20塩基対のsgRNAをコードしており、これはMS2-p65-HSF1複合体を活性化部位に誘導する2つのMS2 RNAアプタマーと融合しており、さらにピューロマイシン耐性遺伝子が付随している。これら3つのプラスミドは、システム構成要素すべてが均等に発現するよう、質量比1:1:1で導入される。

標的遺伝子座に集合すると、SAM複合体はTLR8転写開始点の上流約200 bpの領域に結合し、そこでVP64、p65、およびHSF1が協調して転写装置を動員し、内因性TLR8の発現上昇を促進する。ヌクレアーゼ活性を持つCas9とは異なり、 dCas9は二本鎖切断を導入したりゲノム配列を改変したりしないため、天然のTLR8遺伝子座が保持され、内因性遺伝子座におけるTLR8依存性の転写応答の研究が可能となります。これにより、機能解析、標的遺伝子の同定、およびTLR8発現が沈黙または低下した腫瘍細胞におけるTLR8経路の回復のモデル化を行う上で、貴重なツールとなります。

研究用のみ。診断用または治療用ではありません。