TLR5 Plasmídeo de ativação de CRISPR (h): sc-401154-ACT

O TLR5 humano codifica o receptor Toll-like 5, um receptor de reconhecimento de padrões que detecta a flagelina bacteriana e inicia a sinalização da imunidade inata na membrana plasmática. Após a ligação ao ligante, o TLR5 sinaliza principalmente pela via dependente de MYD88 para ativar as vias de NF-κB e MAPK, promovendo a transcrição de citocinas e quimiocinas pró-inflamatórias que moldam as respostas imunes mucosas e sistêmicas. A atividade do TLR5 influencia a função de barreira epitelial e as interações hospedeiro–microbioma, e alterações na sinalização foram associadas a fenótipos inflamatórios e à suscetibilidade a infecções. Por seu papel central no reconhecimento de patógenos e na regulação do tônus imune, o TLR5 é frequentemente estudado em modelos celulares de imunologia, microbiologia e inflamação.

TLR5 O Plasmídeo de Ativação CRISPR (h) oferece uma abordagem direcionada e não destrutiva para regular positivamente a expressão endógena de TLR5 sem alterar a sequência de ADN subjacente.

TLR5 O Plasmídeo de Ativação CRISPR (h) é um sistema mediador de ativação sinérgica (SAM) de três plasmídeos, concebido para a regulação positiva transcricional altamente eficiente e específica do locus TLR5 em linhas celulares humanas. O sistema é construído em torno de uma Cas9 cataliticamente inativa (dCas9) portadora de duas mutações inativadoras (D10A e N863A) que eliminam a atividade nuclease, preservando simultaneamente a ligação ao ADN. Esta dCas9 é fundida com VP64, um potente ativador transcricional, e é coexpressa com um gene de resistência à blasticidina para seleção. O segundo plasmídeo codifica a proteína de fusão MS2-p65-HSF1, um complexo ativador secundário que atua em conjunto com o dCas9-VP64, juntamente com um gene de resistência à higromicina. O terceiro plasmídeo codifica um sgRNA de 20 nt específico para o alvo, fundido a dois aptâmeros de RNA MS2 que recrutam o complexo MS2-p65-HSF1 para o local de ativação, acompanhado por um gene de resistência à puromicina. Os três plasmídeos são administrados numa proporção de massa de 1:1:1 para uma expressão equilibrada de todos os componentes do sistema.

Uma vez montado no locus alvo, o complexo SAM liga-se a cerca de 200 pb a montante do local de início da transcrição TLR5, onde VP64, p65 e HSF1 atuam em conjunto para recrutar a maquinaria transcricional e impulsionar a regulação positiva da expressão endógena de TLR5. Ao contrário da Cas9 com atividade nuclease, o dCas9 não introduz quebras de cadeia dupla nem modifica a sequência genómica, preservando o locus TLR5 nativo e permitindo o estudo de respostas transcricionais dependentes de TLR5 no locus endógeno, tornando-o uma ferramenta valiosa para estudos funcionais, identificação de genes-alvo e modelagem da restauração da via TLR5 em células tumorais com expressão de TLR5 silenciada ou reduzida.

Apenas para uso em investigação. Não se destina a uso diagnóstico ou terapêutico.