TLR4 Plasmídeo de ativação de CRISPR (m): sc-423419-ACT

O gene Tlr4 de camundongo codifica o receptor Toll-like 4 (TLR4), um receptor de reconhecimento de padrões que detecta lipopolissacarídeo bacteriano e determinados ligantes endógenos associados a perigo para iniciar a sinalização imune inata. Após a ativação, o TLR4 aciona cascatas dependentes de MyD88 e de TRIF que convergem em NF-κB, AP-1 e IRF3/7, promovendo programas de citocinas inflamatórias e de interferon tipo I. Essa via orienta a ativação de macrófagos e células dendríticas, influencia a apresentação de antígenos e modula a comunicação cruzada entre a imunidade inata e a adaptativa. A sinalização desregulada de TLR4 é amplamente utilizada como eixo mecanístico em modelos murinos de endotoxemia, inflamação semelhante à sepse, inflamação metabólica, respostas neuroinflamatórias e inflamação associada a tumores no microambiente.

TLR4 O Plasmídeo de Ativação CRISPR (m) oferece uma abordagem direcionada e não destrutiva para regular positivamente a expressão endógena de Tlr4 sem alterar a sequência de ADN subjacente.

TLR4 O Plasmídeo de Ativação CRISPR (m) é um sistema mediador de ativação sinérgica (SAM) de três plasmídeos, concebido para a regulação positiva transcricional altamente eficiente e específica do locus Tlr4 em linhas celulares humanas. O sistema é construído em torno de uma Cas9 cataliticamente inativa (dCas9) portadora de duas mutações inativadoras (D10A e N863A) que eliminam a atividade nuclease, preservando simultaneamente a ligação ao ADN. Esta dCas9 é fundida com VP64, um potente ativador transcricional, e é coexpressa com um gene de resistência à blasticidina para seleção. O segundo plasmídeo codifica a proteína de fusão MS2-p65-HSF1, um complexo ativador secundário que atua em conjunto com o dCas9-VP64, juntamente com um gene de resistência à higromicina. O terceiro plasmídeo codifica um sgRNA de 20 nt específico para o alvo, fundido a dois aptâmeros de RNA MS2 que recrutam o complexo MS2-p65-HSF1 para o local de ativação, acompanhado por um gene de resistência à puromicina. Os três plasmídeos são administrados numa proporção de massa de 1:1:1 para uma expressão equilibrada de todos os componentes do sistema.

Uma vez montado no locus alvo, o complexo SAM liga-se a cerca de 200 pb a montante do local de início da transcrição Tlr4, onde VP64, p65 e HSF1 atuam em conjunto para recrutar a maquinaria transcricional e impulsionar a regulação positiva da expressão endógena de TLR4. Ao contrário da Cas9 com atividade nuclease, o dCas9 não introduz quebras de cadeia dupla nem modifica a sequência genómica, preservando o locus Tlr4 nativo e permitindo o estudo de respostas transcricionais dependentes de TLR4 no locus endógeno, tornando-o uma ferramenta valiosa para estudos funcionais, identificação de genes-alvo e modelagem da restauração da via TLR4 em células tumorais com expressão de Tlr4 silenciada ou reduzida.

Apenas para uso em investigação. Não se destina a uso diagnóstico ou terapêutico.