TLR4 CRISPR Activationプラスミド (h): sc-400068-ACT
- 対象生物種: human
- 20 µg のトランスフェクション準備済み、精製したプラスミドDNA、～20回トランスフェクション
- TLR4 CRISPR Activationプラスミド (h)は、特異的に遺伝子の発現量を増加させるため、相乗的活性化メディエーター(SAM)転写活性化システムです。
- TLR4 CRISPR Activationプラスミド (h)は、1:1:1の質量比で以下の3つのプラスミドがら成る：トランス活性化ドメインVP64に溶解する非活性化されたCas9 (dCas9)ヌクレアーゼ(D10A と H840A)をコード化したのプラスミド（ブラストサイジン耐性遺伝子を含めて）、MS2-p65-HSF1融合蛋白質をコード化したのプラスミド（ハイグロマイシン耐性遺伝子を含めて）、2つのMS2 RNAアプタマーに溶解する目標特異的な20ntガイドRNAをコード化したのプラスミド（ピューロマイシン耐性遺伝子を含めて）。
- 得られたSAM複合体は、部位特異的な約200-250nt転写開始点の上流の領域に結合し、転写因子の強いリクルートメントを提供し、遺伝子の高い活性化効果が得られます。
- TLR4 CRISPR活性化プラスミド（h）およびTLR4 CRISPR活性化プラスミド（h2）によってコードされるgRNAは、TLR4転写開始点の上流にある異なる調節領域を標的としています。いずれか一方、または両方のデザインが利用可能である可能性があります
- トランスフェクションの後、遺伝子ノックアウト効果は、抗体を用いたWB、IFまたはIHCによって検定されることができます: TLR4 抗体 (25): sc-293072
注文情報
| 製品名 | カタログ # | 単位 | 価格 | 数量 | お気に入り | |
TLR4 CRISPR Activationプラスミド (h) | sc-400068-ACT | 20 µg | $397.00 | |||
TLR4 CRISPR Activationプラスミド (h2) | sc-400068-ACT-2 | 20 µg | $397.00 |
ヒトTLR4（Toll様受容体4）は、細胞膜上でリポ多糖（LPS）をはじめとする病原体関連分子パターン（PAMP）および損傷関連分子パターン（DAMP）を認識するパターン認識受容体です。MD-2やCD14などの共受容体とリガンドが結合すると、TLR4はMyD88依存性およびTRIF依存性のシグナル伝達カスケードを開始し、NF-κB、AP-1、IRF3を活性化します。これにより、炎症性サイトカインやI型インターフェロン応答に関わる転写プログラムが誘導されます。これらの経路は、自然免疫の活性化、白血球の動員、ならびに抗原提示細胞を介した獲得免疫とのクロストークを統合的に制御します。TLR4シグナルの制御破綻は慢性炎症状態や免疫介在性病態に関与するとされ、敗血症の病態生物学、動脈硬化、代謝性炎症、腫瘍関連炎症などの文脈で広く研究されています。
TLR4 CRISPR活性化プラスミド（h）は、基盤となるDNA配列を変更することなく、内因性TLR4の発現を標的化し、非破壊的にアップレギュレートするアプローチを提供します。
TLR4 CRISPR 活性化プラスミド (h) は、ヒト細胞株における TLR4 遺伝子座の高効率かつ部位特異的な転写アップレギュレーションのために設計された、3 つのプラスミドからなる相乗的活性化メディエーター (SAM) システムです。このシステムは、DNA結合能を維持しつつヌクレアーゼ活性を失わせる2つの不活性化変異（D10AおよびN863A）を有する、触媒活性のないCas9（dCas9）を中核としています。このdCas9は、強力な転写活性化因子であるVP64と融合しており、選別用のブラスティシジン耐性遺伝子と共に共発現します。2番目のプラスミドは、dCas9-VP64と協調して機能する二次活性化複合体であるMS2-p65-HSF1融合タンパク質をコードしており、ヒグロマイシン耐性遺伝子と共に発現する。3番目のプラスミドは、標的特異的な20塩基対のsgRNAをコードしており、これはMS2-p65-HSF1複合体を活性化部位に誘導する2つのMS2 RNAアプタマーと融合しており、さらにピューロマイシン耐性遺伝子が付随している。これら3つのプラスミドは、システム構成要素すべてが均等に発現するよう、質量比1:1:1で導入される。
標的遺伝子座に集合すると、SAM複合体はTLR4転写開始点の上流約200 bpの領域に結合し、そこでVP64、p65、およびHSF1が協調して転写装置を動員し、内因性TLR4の発現上昇を促進する。ヌクレアーゼ活性を持つCas9とは異なり、 dCas9は二本鎖切断を導入したりゲノム配列を改変したりしないため、天然のTLR4遺伝子座が保持され、内因性遺伝子座におけるTLR4依存性の転写応答の研究が可能となります。これにより、機能解析、標的遺伝子の同定、およびTLR4発現が沈黙または低下した腫瘍細胞におけるTLR4経路の回復のモデル化を行う上で、貴重なツールとなります。
研究用のみ。診断用または治療用ではありません。