TLR1 CRISPR Activationプラスミド (h): sc-402458-ACT

ヒトTLR1は、Toll様受容体1（Toll-like receptor 1）をコードするパターン認識受容体であり、細胞表面でTLR2とヘテロ二量体を形成して、トリアシル化細菌リポペプチドやその他の微生物由来リガンドを検知します。活性化されると、TLR1はMYD88およびIRAK依存性カスケードを介してシグナル伝達を行い、NF-κBおよびMAPK経路を刺激して、炎症性サイトカインや共刺激プログラムを誘導し、自然免疫と獲得免疫の形成に関与します。TLR1の活性は、白血球の活性化、バリア防御、抗原提示細胞の成熟に影響を与え、より広範なToll様受容体シグナル伝達ネットワークと統合されます。TLR1の遺伝的変異または発現の異常は、感染に対する感受性の変化や炎症性表現型と関連づけられており、宿主—微生物相互作用や免疫介在性疾患の機序を研究するうえで重要です。

TLR1 CRISPR活性化プラスミド（h）は、基盤となるDNA配列を変更することなく、内因性TLR1の発現を標的化し、非破壊的にアップレギュレートするアプローチを提供します。

TLR1 CRISPR 活性化プラスミド (h) は、ヒト細胞株における TLR1 遺伝子座の高効率かつ部位特異的な転写アップレギュレーションのために設計された、3 つのプラスミドからなる相乗的活性化メディエーター (SAM) システムです。このシステムは、DNA結合能を維持しつつヌクレアーゼ活性を失わせる2つの不活性化変異（D10AおよびN863A）を有する、触媒活性のないCas9（dCas9）を中核としています。このdCas9は、強力な転写活性化因子であるVP64と融合しており、選別用のブラスティシジン耐性遺伝子と共に共発現します。2番目のプラスミドは、dCas9-VP64と協調して機能する二次活性化複合体であるMS2-p65-HSF1融合タンパク質をコードしており、ヒグロマイシン耐性遺伝子と共に発現する。3番目のプラスミドは、標的特異的な20塩基対のsgRNAをコードしており、これはMS2-p65-HSF1複合体を活性化部位に誘導する2つのMS2 RNAアプタマーと融合しており、さらにピューロマイシン耐性遺伝子が付随している。これら3つのプラスミドは、システム構成要素すべてが均等に発現するよう、質量比1:1:1で導入される。

標的遺伝子座に集合すると、SAM複合体はTLR1転写開始点の上流約200 bpの領域に結合し、そこでVP64、p65、およびHSF1が協調して転写装置を動員し、内因性TLR1の発現上昇を促進する。ヌクレアーゼ活性を持つCas9とは異なり、 dCas9は二本鎖切断を導入したりゲノム配列を改変したりしないため、天然のTLR1遺伝子座が保持され、内因性遺伝子座におけるTLR1依存性の転写応答の研究が可能となります。これにより、機能解析、標的遺伝子の同定、およびTLR1発現が沈黙または低下した腫瘍細胞におけるTLR1経路の回復のモデル化を行う上で、貴重なツールとなります。

研究用のみ。診断用または治療用ではありません。