Titin CRISPR Activationプラスミド (h): sc-402827-ACT

ヒトのTTNは、ZディスクからM線に至るまで伸びる巨大なサルコメアタンパク質であるチチンをコードしており、分子足場およびばねとして機能することで、横紋筋における筋原線維の完全性、受動弾性、ならびに力の伝達を維持します。チチンは、アクチン、ミオシン、そしてZディスク／M線複合体との相互作用を介してサルコメアの組み立てを統合的に制御し、伸展刺激を収縮装置のリモデリングへと結び付けるメカノセンシング過程にも寄与します。TTNの働きは、細胞骨格の組織化、タンパク質品質管理、ストレス応答性シグナル伝達など、筋の構造的恒常性を担う経路と統合され、心筋細胞および骨格筋線維の機能を形作ります。TTNの遺伝的変異や発現制御の破綻は筋疾患の表現型と強く関連しており、ヒトモデルにおけるサルコメア生物学や遺伝子型—機能関係を研究する上で中心的な座位となっています。

Titin CRISPR活性化プラスミド（h）は、基盤となるDNA配列を変更することなく、内因性TTNの発現を標的化し、非破壊的にアップレギュレートするアプローチを提供します。

Titin CRISPR 活性化プラスミド (h) は、ヒト細胞株における TTN 遺伝子座の高効率かつ部位特異的な転写アップレギュレーションのために設計された、3 つのプラスミドからなる相乗的活性化メディエーター (SAM) システムです。このシステムは、DNA結合能を維持しつつヌクレアーゼ活性を失わせる2つの不活性化変異（D10AおよびN863A）を有する、触媒活性のないCas9（dCas9）を中核としています。このdCas9は、強力な転写活性化因子であるVP64と融合しており、選別用のブラスティシジン耐性遺伝子と共に共発現します。2番目のプラスミドは、dCas9-VP64と協調して機能する二次活性化複合体であるMS2-p65-HSF1融合タンパク質をコードしており、ヒグロマイシン耐性遺伝子と共に発現する。3番目のプラスミドは、標的特異的な20塩基対のsgRNAをコードしており、これはMS2-p65-HSF1複合体を活性化部位に誘導する2つのMS2 RNAアプタマーと融合しており、さらにピューロマイシン耐性遺伝子が付随している。これら3つのプラスミドは、システム構成要素すべてが均等に発現するよう、質量比1:1:1で導入される。

標的遺伝子座に集合すると、SAM複合体はTTN転写開始点の上流約200 bpの領域に結合し、そこでVP64、p65、およびHSF1が協調して転写装置を動員し、内因性Titinの発現上昇を促進する。ヌクレアーゼ活性を持つCas9とは異なり、 dCas9は二本鎖切断を導入したりゲノム配列を改変したりしないため、天然のTTN遺伝子座が保持され、内因性遺伝子座におけるTitin依存性の転写応答の研究が可能となります。これにより、機能解析、標的遺伝子の同定、およびTTN発現が沈黙または低下した腫瘍細胞におけるTitin経路の回復のモデル化を行う上で、貴重なツールとなります。

研究用のみ。診断用または治療用ではありません。