Tim13A/B Plasmídeo CRISPR/Cas9 KO (h): sc-408855

Visão geral

TIMM13 codifica a pequena chaperona Tim13A/B do espaço intermembranar mitocondrial, que coopera com TIMM8A/TIMM8B para escoltar proteínas precursoras hidrofóbicas do complexo TOM até a maquinaria de inserção na membrana interna. Essa via sustenta a fosforilação oxidativa ao promover a biogênese adequada de transportadores da membrana interna e de outras proteínas multipasso, ligando a função de TIMM13 à importação proteica mitocondrial, à manutenção do potencial de membrana e à proteostase. A disrupção das redes de chaperonas pequenas Tim pode contribuir para disfunção mitocondrial, aumento de respostas celulares ao estresse e comprometimento do metabolismo energético, processos frequentemente investigados em estudos de neurodegeneração e do metabolismo do câncer. Assim, TIMM13 é relevante para pesquisas sobre controle de qualidade mitocondrial, homeostase da cadeia respiratória e sinalização adaptativa ao estresse.

O Plasmídeo CRISPR/Cas9 KO Tim13A/B (h) é um conjunto de plasmídeos concebido para a interrupção direcionada do gene TIMM13 em linhas celulares human. Cada plasmídeo coexpressa um RNA guia único (sgRNA) direcionado a um local distinto dentro do TIMM13, juntamente com a nuclease Cas9 de Streptococcus pyogenes. Os plasmídeos também codificam GFP, permitindo a identificação fluorescente e o enriquecimento de células transfectadas com sucesso por microscopia de fluorescência ou citometria de fluxo.

O design multiguia aumenta a probabilidade de gerar inserções ou deleções (indels) que interrompem o quadro de leitura aberto do TIMM13 na sequência da formação de quebras de cadeia dupla mediadas por Cas9. As quebras de ADN introduzidas pelo sistema CRISPR/Cas9 são reparadas através de vias endógenas de junção de extremidades não homólogas (NHEJ), resultando frequentemente em mutações de deslocamento de quadro que abolir a expressão da proteína Tim13A/B.

Este sistema de knockout CRISPR permite a geração eficiente de modelos celulares com deficiência de TIMM13 para a investigação da sinalização de Tim13A/B, estudos de genómica funcional, investigação em biologia do cancro e avaliação de respostas terapêuticas em linhas celulares humanas.

Características principais

• sgRNAs direcionados para o(s) exão(ões) TIMM13 críticos para a função Tim13A/B
  Coexpressão de SpCas9 e sgRNA a partir de um único plasmídeo para simplificar a administração
  Repórter GFP para identificação de células transfectadas
  Conjunto de plasmídeos direcionados para múltiplos locais genómicos TIMM13 para melhorar a eficiência do knockout
  Compatível com administração por transfecção

Variantes de Design

CRISPRs +/- HDRs

• Os gRNAs codificados pelo Tim13A/B Plasmídeo CRISPR/Cas9 KO (h) e pelo Tim13A/B Plasmídeo CRISPR/Cas9 KO (h2) têm como alvo locais distintos dentro do locus TIMM13. Pode estar disponível um ou ambos os designs de alvo. Consulte Produtos Relacionados para verificar a disponibilidade.
  As construções doadoras HDR codificadas pelo Tim13A/B Plasmídeo HDR (h) e o Plasmídeo HDR Tim13A/B (h2) contêm uma cassete de resistência à puromicina e um repórter RFP flanqueado por braços de homologia TIMM13 para suportar a reparação dirigida por homologia em locais-alvo TIMM13 definidos, correspondentes aos desenhos de KO CRISPR/Cas9. A disponibilidade do doador HDR pode variar. Consulte Produtos Relacionados para verificar a disponibilidade.

Apenas para uso em investigação. Não se destina a uso diagnóstico ou terapêutico.