TIM-3 CRISPR/Cas9 KOプラスミド (m): sc-431363

概要

Havcr2は免疫調節受容体TIM-3をコードしており、TIM-3はI型膜タンパク質として、活性化T細胞、制御性T細胞、樹状細胞、ならびに自然免疫系の各サブセットを含む複数の免疫細胞系統に発現しています。TIM-3は抗原刺激下でサイトカイン産生や免疫シナプス機能に影響しつつ、T細胞の活性化閾値、免疫寛容、エフェクター分化を規定するシグナルを統合します。ガレクチン9やホスファチジルセリンなどのリガンドとの相互作用を介して、TIM-3はT細胞機能不全や慢性的な抗原曝露に関連する経路に関与し、免疫疲弊プログラムや炎症回路の調節と結び付けられています。マウスモデルでは、免疫恒常性や組織特異的炎症の理解を目的として、自己免疫、慢性感染、腫瘍免疫の文脈でHavcr2/TIM-3の生物学が広く検討されています。

TIM-3 CRISPR/Cas9 KOプラスミド（m）は、mouse細胞株におけるHavcr2遺伝子の標的破壊を目的として設計されたプラスミドのプールである。各プラスミドは、Havcr2内の異なる部位を標的とする固有のシングルガイドRNA（sgRNA）と、Streptococcus pyogenes由来のCas9ヌクレアーゼを共発現します。また、これらのプラスミドはGFPをコードしており、蛍光顕微鏡やフローサイトメトリーを用いて、トランスフェクションに成功した細胞を蛍光で識別・濃縮することが可能です。

このマルチガイド設計により、Cas9による二本鎖切断の形成後に、Havcr2のオープンリーディングフレームを破壊する挿入または欠失（インデル）が生じる可能性が高まります。CRISPR/Cas9システムによって導入されたDNA切断は、内因性の非相同末端結合（NHEJ）経路を通じて修復され、その結果、TIM-3タンパク質の発現を阻害するフレームシフト変異が生じることが頻繁にあります。

このCRISPRノックアウトシステムにより、TIM-3シグナル伝達、機能ゲノミクス研究、がん生物学研究、およびヒト細胞株における治療反応の評価を目的とした、Havcr2欠損細胞モデルの効率的な作製が可能となる。

主な特徴

• TIM-3の機能に不可欠なHavcr2エクソンを標的とするsgRNA
  導入を簡素化するための、単一プラスミドからのSpCas9およびsgRNAの共発現
  トランスフェクトされた細胞を識別するためのGFPレポーター
  ノックアウト効率を向上させるための、Havcr2ゲノム上の複数の部位を標的とするプラスミドのプール
  トランスフェクションによる導入に対応

設計バリエーション

CRISPRs +/- HDR

• TIM-3 CRISPR/Cas9 KOプラスミド（m）およびTIM-3 CRISPR/Cas9 KOプラスミド（m2）によってコードされるgRNAは、Havcr2遺伝子座内の異なる部位を標的としています。いずれか一方、または両方の標的設計が利用可能な場合があります。入手可能性については「関連製品」を参照してください。
  TIM-3 HDRプラスミド（m）および TIM-3 HDRプラスミド（m2）によってコードされるHDRドナー構築体は、プロマイシン耐性カセットとRFPレポーターを含み、これらはHavcr2ホモロジーアームに挟まれており、CRISPR/Cas9 KO設計に対応する特定のHavcr2標的部位でのホモロジー依存修復をサポートします。HDRドナーの入手可能性は異なる場合があります。入手可能性については「関連製品」をご確認ください。

研究用のみ。診断用または治療用ではありません。