TIF1β Plasmídeo de ativação de CRISPR (h): sc-401999-ACT

TRIM28, também conhecido como TIF1β (KAP1), é um correpressor transcricional associado a KRAB que coordena o silenciamento epigenético de genes ao recrutar modificadores de cromatina, como SETDB1 e o complexo NuRD/HDAC, para estabelecer heterocromatina marcada por H3K9me3. Ele desempenha papéis centrais na regulação de elementos transponíveis, na estabilidade genômica, nas respostas a danos no DNA e na manutenção da identidade celular por meio de um amplo controle de programas transcricionais. A repressão dependente de TRIM28 faz interface com vias que controlam a organização da cromatina, a sinalização mediada por ubiquitina e redes transcricionais do desenvolvimento. A desregulação da atividade de TRIM28/TIF1β tem sido associada a estados de diferenciação alterados e à repressão transcricional aberrante observada em múltiplos contextos relevantes para doenças, incluindo remodelamento epigenético oncogênico e fenótipos do neurodesenvolvimento.

TIF1β O Plasmídeo de Ativação CRISPR (h) oferece uma abordagem direcionada e não destrutiva para regular positivamente a expressão endógena de TRIM28 sem alterar a sequência de ADN subjacente.

TIF1β O Plasmídeo de Ativação CRISPR (h) é um sistema mediador de ativação sinérgica (SAM) de três plasmídeos, concebido para a regulação positiva transcricional altamente eficiente e específica do locus TRIM28 em linhas celulares humanas. O sistema é construído em torno de uma Cas9 cataliticamente inativa (dCas9) portadora de duas mutações inativadoras (D10A e N863A) que eliminam a atividade nuclease, preservando simultaneamente a ligação ao ADN. Esta dCas9 é fundida com VP64, um potente ativador transcricional, e é coexpressa com um gene de resistência à blasticidina para seleção. O segundo plasmídeo codifica a proteína de fusão MS2-p65-HSF1, um complexo ativador secundário que atua em conjunto com o dCas9-VP64, juntamente com um gene de resistência à higromicina. O terceiro plasmídeo codifica um sgRNA de 20 nt específico para o alvo, fundido a dois aptâmeros de RNA MS2 que recrutam o complexo MS2-p65-HSF1 para o local de ativação, acompanhado por um gene de resistência à puromicina. Os três plasmídeos são administrados numa proporção de massa de 1:1:1 para uma expressão equilibrada de todos os componentes do sistema.

Uma vez montado no locus alvo, o complexo SAM liga-se a cerca de 200 pb a montante do local de início da transcrição TRIM28, onde VP64, p65 e HSF1 atuam em conjunto para recrutar a maquinaria transcricional e impulsionar a regulação positiva da expressão endógena de TIF1β. Ao contrário da Cas9 com atividade nuclease, o dCas9 não introduz quebras de cadeia dupla nem modifica a sequência genómica, preservando o locus TRIM28 nativo e permitindo o estudo de respostas transcricionais dependentes de TIF1β no locus endógeno, tornando-o uma ferramenta valiosa para estudos funcionais, identificação de genes-alvo e modelagem da restauração da via TIF1β em células tumorais com expressão de TRIM28 silenciada ou reduzida.

Apenas para uso em investigação. Não se destina a uso diagnóstico ou terapêutico.