TIEG1 CRISPR/Cas9 KOプラスミド (h): sc-402480

概要

KLF10は、TIEG1（TGF-β誘導性早期増殖応答タンパク質1）をコードする遺伝子であり、Krüppel様の亜鉛フィンガー型転写因子として、形質転換増殖因子β（TGF-β）/SMADシグナル伝達を、状況依存的な細胞周期進行・分化・アポトーシスの制御と統合します。TIEG1は、細胞外マトリックスのリモデリングや系譜決定に関わる転写プログラムを調節し、上皮細胞・骨細胞・免疫細胞といった文脈において、MAPK経路やホルモンシグナル経路とのクロストークも調整し得ます。KLF10/TIEG1活性の変化は、線維化応答の破綻、骨芽細胞機能および骨リモデリングの異常、腫瘍抑制的な転写ネットワークの変調と関連づけられており、増殖制御や組織恒常性のメカニズム研究において重要です。早期応答因子としての位置づけにより、刺激依存的な遺伝子制御と下流経路の配線（ネットワーク構築）を解析するうえで有用なノードとなります。

TIEG1 CRISPR/Cas9 KOプラスミド（h）は、human細胞株におけるKLF10遺伝子の標的破壊を目的として設計されたプラスミドのプールである。各プラスミドは、KLF10内の異なる部位を標的とする固有のシングルガイドRNA（sgRNA）と、Streptococcus pyogenes由来のCas9ヌクレアーゼを共発現します。また、これらのプラスミドはGFPをコードしており、蛍光顕微鏡やフローサイトメトリーを用いて、トランスフェクションに成功した細胞を蛍光で識別・濃縮することが可能です。

このマルチガイド設計により、Cas9による二本鎖切断の形成後に、KLF10のオープンリーディングフレームを破壊する挿入または欠失（インデル）が生じる可能性が高まります。CRISPR/Cas9システムによって導入されたDNA切断は、内因性の非相同末端結合（NHEJ）経路を通じて修復され、その結果、TIEG1タンパク質の発現を阻害するフレームシフト変異が生じることが頻繁にあります。

このCRISPRノックアウトシステムにより、TIEG1シグナル伝達、機能ゲノミクス研究、がん生物学研究、およびヒト細胞株における治療反応の評価を目的とした、KLF10欠損細胞モデルの効率的な作製が可能となる。

主な特徴

• TIEG1の機能に不可欠なKLF10エクソンを標的とするsgRNA
  導入を簡素化するための、単一プラスミドからのSpCas9およびsgRNAの共発現
  トランスフェクトされた細胞を識別するためのGFPレポーター
  ノックアウト効率を向上させるための、KLF10ゲノム上の複数の部位を標的とするプラスミドのプール
  トランスフェクションによる導入に対応

設計バリエーション

CRISPRs +/- HDR

• TIEG1 CRISPR/Cas9 KOプラスミド（h）およびTIEG1 CRISPR/Cas9 KOプラスミド（h2）によってコードされるgRNAは、KLF10遺伝子座内の異なる部位を標的としています。いずれか一方、または両方の標的設計が利用可能な場合があります。入手可能性については「関連製品」を参照してください。
  TIEG1 HDRプラスミド（h）および TIEG1 HDRプラスミド（h2）によってコードされるHDRドナー構築体は、プロマイシン耐性カセットとRFPレポーターを含み、これらはKLF10ホモロジーアームに挟まれており、CRISPR/Cas9 KO設計に対応する特定のKLF10標的部位でのホモロジー依存修復をサポートします。HDRドナーの入手可能性は異なる場合があります。入手可能性については「関連製品」をご確認ください。

研究用のみ。診断用または治療用ではありません。