Plásmido CRISPR de Activación (h) Thyroglobulin: sc-401985-ACT

TG codifica la tiroglobulina, una gran glicoproteína secretada producida por las células foliculares de la tiroides que actúa como el principal andamiaje para la biosíntesis de hormonas tiroideas. En la luz folicular, la yodación y el acoplamiento de residuos tirosilo en la tiroglobulina permiten la producción de T3 y T4 y se integran con el transporte de yodo, la actividad de la tiroperoxidasa y los programas de diferenciación tiroidea impulsados por la TSH. La expresión y el procesamiento de TG están vinculados al plegamiento de proteínas y al control de calidad del retículo endoplásmico, así como al tráfico vesicular que regulan la secreción de tiroglobulina y la homeostasis del coloide. La desregulación de TG se asocia con defectos hereditarios en la síntesis de hormonas tiroideas y es relevante para estudios sobre disfunción tiroidea, biología de autoantígenos e identidad de las células foliculares.

Thyroglobulin El plásmido de activación CRISPR (h) proporciona un enfoque específico y no destructivo para regular al alza la expresión endógena de TG sin alterar la secuencia de ADN subyacente.

Thyroglobulin El plásmido de activación CRISPR (h) es un sistema mediador de activación sinérgica (SAM) de tres plásmidos diseñado para la regulación al alza transcripcional altamente eficiente y específica del locus TG en líneas celulares humanas. El sistema se basa en una Cas9 catalíticamente inactiva (dCas9) que porta dos mutaciones inactivadoras (D10A y N863A) que eliminan la actividad nucleasa al tiempo que conservan la unión al ADN. Esta dCas9 se fusiona con VP64, un potente activador transcripcional, y se coexpresa con un gen de resistencia a la blasticidina para la selección. El segundo plásmido codifica la proteína de fusión MS2-p65-HSF1, un complejo activador secundario que actúa en conjunto con dCas9-VP64, junto con un gen de resistencia a la higromicina. El tercer plásmido codifica un ARN guía (sgRNA) específico del objetivo de 20 nt fusionado a dos aptámeros de ARN MS2 que reclutan el complejo MS2-p65-HSF1 al sitio de activación, acompañado de un gen de resistencia a la puromicina. Los tres plásmidos se administran en una proporción de masa de 1:1:1 para una expresión equilibrada de todos los componentes del sistema.

Una vez ensamblado en el locus diana, el complejo SAM se une aproximadamente 200 pb aguas arriba del sitio de inicio transcripcional TG, donde VP64, p65 y HSF1 actúan de forma coordinada para reclutar la maquinaria transcripcional e impulsar la regulación al alza de la expresión endógena de Thyroglobulin. A diferencia de la Cas9 con actividad nucleasa, dCas9 no introduce roturas de doble cadena ni modifica la secuencia genómica, preservando el locus nativo TG y permitiendo el estudio de las respuestas transcripcionales dependientes de Thyroglobulin en el locus endógeno, lo que la convierte en una herramienta valiosa para estudios funcionales, la identificación de genes diana y la modelización de la restauración de la vía Thyroglobulin en células tumorales con expresión de TG silenciada o reducida.

Sólo para uso en investigación. No destinado a uso diagnóstico o terapéutico.