THP Plasmídeo CRISPR/Cas9 KO (m): sc-423607
- alvos específicos: mouse
- 20 µg de plasmídeo de DNA pronto para transfecção; Suficiente para até 20 transfecções
- THP O Plasmídeo CRISPR/Cas9 Knockout (KO) (m) é um conjunto de plasmídeos, cada um codificando a nuclease Cas9 e um RNA guia (gRNA) de 20 nt específico para o alvo, concebido para uma eficiência máxima de knockout utilizando sequências derivadas da biblioteca GeCKO v2
- As sequências de gRNA direcionam a Cas9 para induzir quebras de cadeia dupla (DSBs) específicas do local no locus genómico THP, resultando no knockout do gene através da junção de extremidades não homólogas (NHEJ)
- Os genes de resistência à puromicina e RFP são flanqueados por sítios LoxP, permitindo a remoção de marcadores de seleção através da recombinase Cre (Cre Vector: sc-418923) após o estabelecimento de linhas celulares knockout estáveis
- Após a transfecção, a eficácia do processo de nocaute genético por ser testada WB, IF ou IHC usando o anticorpo:THP Anticorpo (B-2): sc-271022
Informacoes sobre ordens
| Nome do Produto | Numero de Catalogo | UNID | Preco | Qde | FAVORITOS | |
THP Plasmídeo CRISPR/Cas9 KO (m) | sc-423607 | 20 µg | $397.00 |
Visão geral
Umod codifica a proteína de Tamm–Horsfall (THP, uromodulina), a glicoproteína secretada mais abundante na urina de mamíferos, produzida por células epiteliais do ramo ascendente espesso da alça de Henle e do túbulo distal inicial. A THP é liberada para o lúmen tubular, onde contribui para a homeostase epitelial, modula o manuseio de íons por meio de interações com processos de transporte, como a reabsorção de NaCl dependente de NKCC2, e ajuda a estruturar redes proteicas urinárias por meio da formação de polímeros. Por efeitos nas respostas ao estresse tubular, na sinalização imune inata e em programas de diferenciação epitelial, a atividade de UMOD influencia a fisiologia renal e a suscetibilidade à lesão túbulo-intersticial. Alterações genéticas e funcionais de Umod estão associadas a fenótipos de doença renal, incluindo a doença renal associada à uromodulina, características relacionadas à hiperuricemia e risco de doença renal crônica, tornando-o um locus-chave para estudos mecanísticos em modelos murinos.
O Plasmídeo CRISPR/Cas9 KO THP (m) é um conjunto de plasmídeos concebido para a interrupção direcionada do gene Umod em linhas celulares mouse. Cada plasmídeo coexpressa um RNA guia único (sgRNA) direcionado a um local distinto dentro do Umod, juntamente com a nuclease Cas9 de Streptococcus pyogenes. Os plasmídeos também codificam GFP, permitindo a identificação fluorescente e o enriquecimento de células transfectadas com sucesso por microscopia de fluorescência ou citometria de fluxo.
O design multiguia aumenta a probabilidade de gerar inserções ou deleções (indels) que interrompem o quadro de leitura aberto do Umod na sequência da formação de quebras de cadeia dupla mediadas por Cas9. As quebras de ADN introduzidas pelo sistema CRISPR/Cas9 são reparadas através de vias endógenas de junção de extremidades não homólogas (NHEJ), resultando frequentemente em mutações de deslocamento de quadro que abolir a expressão da proteína THP.
Este sistema de knockout CRISPR permite a geração eficiente de modelos celulares com deficiência de Umod para a investigação da sinalização de THP, estudos de genómica funcional, investigação em biologia do cancro e avaliação de respostas terapêuticas em linhas celulares humanas.
Características principais
- sgRNAs direcionados para o(s) exão(ões) Umod críticos para a função THP
Coexpressão de SpCas9 e sgRNA a partir de um único plasmídeo para simplificar a administração
Repórter GFP para identificação de células transfectadas
Conjunto de plasmídeos direcionados para múltiplos locais genómicos Umod para melhorar a eficiência do knockout
Compatível com administração por transfecção
Variantes de Design
CRISPRs +/- HDRs
- Os gRNAs codificados pelo THP Plasmídeo CRISPR/Cas9 KO (m) e pelo THP Plasmídeo CRISPR/Cas9 KO (m2) têm como alvo locais distintos dentro do locus Umod. Pode estar disponível um ou ambos os designs de alvo. Consulte Produtos Relacionados para verificar a disponibilidade.
As construções doadoras HDR codificadas pelo THP Plasmídeo HDR (m) e o Plasmídeo HDR THP (m2) contêm uma cassete de resistência à puromicina e um repórter RFP flanqueado por braços de homologia Umod para suportar a reparação dirigida por homologia em locais-alvo Umod definidos, correspondentes aos desenhos de KO CRISPR/Cas9. A disponibilidade do doador HDR pode variar. Consulte Produtos Relacionados para verificar a disponibilidade.
Apenas para uso em investigação. Não se destina a uso diagnóstico ou terapêutico.