THAP1 CRISPR Activationプラスミド (h): sc-405020-ACT

THAP1 は、THAP ドメインを含む DNA 結合性転写因子をコードしており、細胞周期制御、クロマチン関連の転写抑制、ならびに神経機能に結び付いた遺伝子発現プログラムを制御します。THAP1 は核内補助因子と相互作用し、標的遺伝子のプロモーター特異的な制御を介して、増殖・分化・アポトーシスを司る経路に影響を与えることが報告されています。神経系では、THAP1 の活性は転写恒常性および核内構造の維持に関与するとされ、その機能破綻は遺伝性ジストニアの表現型と関連します。転写制御因子としての THAP1 は、配列特異的な DNA 結合と補助因子のリクルートが下流の遺伝子ネットワークをどのように形成するかを研究する上で、有用な結節点となります。

THAP1 CRISPR活性化プラスミド（h）は、基盤となるDNA配列を変更することなく、内因性THAP1の発現を標的化し、非破壊的にアップレギュレートするアプローチを提供します。

THAP1 CRISPR 活性化プラスミド (h) は、ヒト細胞株における THAP1 遺伝子座の高効率かつ部位特異的な転写アップレギュレーションのために設計された、3 つのプラスミドからなる相乗的活性化メディエーター (SAM) システムです。このシステムは、DNA結合能を維持しつつヌクレアーゼ活性を失わせる2つの不活性化変異（D10AおよびN863A）を有する、触媒活性のないCas9（dCas9）を中核としています。このdCas9は、強力な転写活性化因子であるVP64と融合しており、選別用のブラスティシジン耐性遺伝子と共に共発現します。2番目のプラスミドは、dCas9-VP64と協調して機能する二次活性化複合体であるMS2-p65-HSF1融合タンパク質をコードしており、ヒグロマイシン耐性遺伝子と共に発現する。3番目のプラスミドは、標的特異的な20塩基対のsgRNAをコードしており、これはMS2-p65-HSF1複合体を活性化部位に誘導する2つのMS2 RNAアプタマーと融合しており、さらにピューロマイシン耐性遺伝子が付随している。これら3つのプラスミドは、システム構成要素すべてが均等に発現するよう、質量比1:1:1で導入される。

標的遺伝子座に集合すると、SAM複合体はTHAP1転写開始点の上流約200 bpの領域に結合し、そこでVP64、p65、およびHSF1が協調して転写装置を動員し、内因性THAP1の発現上昇を促進する。ヌクレアーゼ活性を持つCas9とは異なり、 dCas9は二本鎖切断を導入したりゲノム配列を改変したりしないため、天然のTHAP1遺伝子座が保持され、内因性遺伝子座におけるTHAP1依存性の転写応答の研究が可能となります。これにより、機能解析、標的遺伝子の同定、およびTHAP1発現が沈黙または低下した腫瘍細胞におけるTHAP1経路の回復のモデル化を行う上で、貴重なツールとなります。

研究用のみ。診断用または治療用ではありません。