Plásmido CRISPR de Activación (h) TGFβ2: sc-400496-ACT

TGFB2 codifica el factor de crecimiento transformante beta 2 (TGFβ2), una citocina secretada que señaliza a través de los receptores de tipo I/II de TGF-β con actividad quinasa de serina/treonina para activar la transcripción dependiente de SMAD y vías no canónicas, incluidas las de MAPK, PI3K/AKT y las GTPasas Rho. TGFβ2 regula la deposición de matriz extracelular, la transición epitelio-mesénquima, las decisiones de destino celular, la modulación inmunitaria y la morfogénesis tisular, contribuyendo a la homeostasis y a la reparación de heridas. La señalización desregulada de TGFB2 se ha implicado en fibrosis y en una remodelación estromal aberrante, así como en funciones dependientes del contexto en la progresión tumoral, la invasión y la evasión inmunitaria. Estas funciones convierten a TGFB2 en un nodo clave para analizar la señalización del microambiente, los programas de diferenciación y el crosstalk entre vías en modelos celulares humanos.

TGFβ2 El plásmido de activación CRISPR (h) proporciona un enfoque específico y no destructivo para regular al alza la expresión endógena de TGFB2 sin alterar la secuencia de ADN subyacente.

TGFβ2 El plásmido de activación CRISPR (h) es un sistema mediador de activación sinérgica (SAM) de tres plásmidos diseñado para la regulación al alza transcripcional altamente eficiente y específica del locus TGFB2 en líneas celulares humanas. El sistema se basa en una Cas9 catalíticamente inactiva (dCas9) que porta dos mutaciones inactivadoras (D10A y N863A) que eliminan la actividad nucleasa al tiempo que conservan la unión al ADN. Esta dCas9 se fusiona con VP64, un potente activador transcripcional, y se coexpresa con un gen de resistencia a la blasticidina para la selección. El segundo plásmido codifica la proteína de fusión MS2-p65-HSF1, un complejo activador secundario que actúa en conjunto con dCas9-VP64, junto con un gen de resistencia a la higromicina. El tercer plásmido codifica un ARN guía (sgRNA) específico del objetivo de 20 nt fusionado a dos aptámeros de ARN MS2 que reclutan el complejo MS2-p65-HSF1 al sitio de activación, acompañado de un gen de resistencia a la puromicina. Los tres plásmidos se administran en una proporción de masa de 1:1:1 para una expresión equilibrada de todos los componentes del sistema.

Una vez ensamblado en el locus diana, el complejo SAM se une aproximadamente 200 pb aguas arriba del sitio de inicio transcripcional TGFB2, donde VP64, p65 y HSF1 actúan de forma coordinada para reclutar la maquinaria transcripcional e impulsar la regulación al alza de la expresión endógena de TGFβ2. A diferencia de la Cas9 con actividad nucleasa, dCas9 no introduce roturas de doble cadena ni modifica la secuencia genómica, preservando el locus nativo TGFB2 y permitiendo el estudio de las respuestas transcripcionales dependientes de TGFβ2 en el locus endógeno, lo que la convierte en una herramienta valiosa para estudios funcionales, la identificación de genes diana y la modelización de la restauración de la vía TGFβ2 en células tumorales con expresión de TGFB2 silenciada o reducida.

Sólo para uso en investigación. No destinado a uso diagnóstico o terapéutico.