TGF beta 1 Plasmide di attivazione CRISPR (m): sc-423364-ACT

Il gene murino **Tgfb1** codifica il **transforming growth factor beta 1** (TGF beta 1), una citochina secreta che segnala principalmente attraverso **TGFBR1/2** per attivare la trascrizione dipendente da **SMAD2/3** e interagire con vie non canoniche come **MAPK**, **PI3K/AKT** e le **Rho GTPasi**. TGF beta 1 è un regolatore centrale del rimodellamento della matrice extracellulare, della transizione epitelio-mesenchimale, della differenziazione delle cellule immunitarie e del mantenimento dell’omeostasi tissutale. Un’attività deregolata di Tgfb1 è ampiamente implicata nel rimodellamento fibrotico, in un’alterata immunosoppressione o infiammazione, in una riparazione delle ferite compromessa e nelle interazioni tra tumore e stroma. Nei modelli murini, la perturbazione di Tgfb1 è ampiamente utilizzata per studiare la segnalazione stromale, la polarizzazione di macrofagi e linfociti T e il controllo della crescita dipendente dal contesto durante lo sviluppo e in fenotipi simili a quelli di malattia.

TGF beta 1 Il plasmide di attivazione CRISPR (m) fornisce un approccio mirato e non distruttivo per sovraregolare l'espressione endogena di Tgfb1 senza alterare la sequenza di DNA sottostante.

TGF beta 1 Il plasmide di attivazione CRISPR (m) è un sistema SAM (mediatore di attivazione sinergico) a tre plasmidi progettato per la sovraregolazione trascrizionale altamente efficiente e sito-specifica del locus Tgfb1 nelle linee cellulari umane. Il sistema è costruito attorno a una Cas9 cataliticamente inattiva (dCas9) che porta due mutazioni inattivanti (D10A e N863A) che eliminano l'attività nucleasica preservando al contempo il legame con il DNA. Questa dCas9 è fusa con VP64, un potente attivatore trascrizionale, ed è coespressa con un gene di resistenza alla blasticidina per la selezione. Il secondo plasmide codifica la proteina di fusione MS2-p65-HSF1, un complesso attivatore secondario che agisce in sinergia con dCas9-VP64, insieme a un gene di resistenza all'igromicina. Il terzo plasmide codifica un sgRNA specifico per il bersaglio di 20 nt fuso a due aptameri di RNA MS2 che reclutano il complesso MS2-p65-HSF1 nel sito di attivazione, accompagnato da un gene di resistenza alla puromicina. I tre plasmidi vengono somministrati in un rapporto di massa 1:1:1 per un'espressione bilanciata di tutti i componenti del sistema.

Una volta assemblato nel locus bersaglio, il complesso SAM si lega a circa 200 bp a monte del sito di inizio della trascrizione Tgfb1, dove VP64, p65 e HSF1 agiscono in modo concertato per reclutare il machinery trascrizionale e guidare la sovraregolazione dell'espressione endogena di TGF beta 1. A differenza della Cas9 con attività nucleasica, dCas9 non introduce rotture a doppio filamento né modifica la sequenza genomica, preservando il locus Tgfb1 nativo e consentendo lo studio delle risposte trascrizionali dipendenti da TGF beta 1 nel locus endogeno, rendendolo uno strumento prezioso per studi funzionali, l'identificazione di geni bersaglio e la modellizzazione del ripristino della via TGF beta 1 nelle cellule tumorali con espressione di Tgfb1 silenziata o ridotta.

Solo per uso di ricerca. Non destinato a uso diagnostico o terapeutico.