TGase2 CRISPR/Cas9 KOプラスミド (m): sc-423375

概要

マウスのTgm2は、トランスグルタミナーゼ2（TGase2）をコードしており、タンパク質の架橋反応、脱アミド化、ポリアミン化を触媒するCa2+依存性の多機能酵素です。さらに、GTP結合能やスキャフォールドとしての機能も示します。TGase2は、細胞外マトリックス（ECM）のリモデリング、細胞接着および遊走、アポトーシス、炎症性シグナル伝達を制御し、NF-κB、TGF-β、インテグリン/FAK、創傷治癒プログラムなどの経路と連携します。その活性は細胞骨格ダイナミクスやマトリックスの硬さに影響し、Tgm2を線維化リモデリングや組織修復応答と結び付けています。前臨床モデルでは、TGase2機能の破綻が神経炎症、代謝ストレスへの適応、腫瘍微小環境のリモデリングと関連することが示されており、関連するマウス細胞種における機構解析研究の動機となっています。

TGase2 CRISPR/Cas9 KOプラスミド（m）は、mouse細胞株におけるTgm2遺伝子の標的破壊を目的として設計されたプラスミドのプールである。各プラスミドは、Tgm2内の異なる部位を標的とする固有のシングルガイドRNA（sgRNA）と、Streptococcus pyogenes由来のCas9ヌクレアーゼを共発現します。また、これらのプラスミドはGFPをコードしており、蛍光顕微鏡やフローサイトメトリーを用いて、トランスフェクションに成功した細胞を蛍光で識別・濃縮することが可能です。

このマルチガイド設計により、Cas9による二本鎖切断の形成後に、Tgm2のオープンリーディングフレームを破壊する挿入または欠失（インデル）が生じる可能性が高まります。CRISPR/Cas9システムによって導入されたDNA切断は、内因性の非相同末端結合（NHEJ）経路を通じて修復され、その結果、TGase2タンパク質の発現を阻害するフレームシフト変異が生じることが頻繁にあります。

このCRISPRノックアウトシステムにより、TGase2シグナル伝達、機能ゲノミクス研究、がん生物学研究、およびヒト細胞株における治療反応の評価を目的とした、Tgm2欠損細胞モデルの効率的な作製が可能となる。

主な特徴

• TGase2の機能に不可欠なTgm2エクソンを標的とするsgRNA
  導入を簡素化するための、単一プラスミドからのSpCas9およびsgRNAの共発現
  トランスフェクトされた細胞を識別するためのGFPレポーター
  ノックアウト効率を向上させるための、Tgm2ゲノム上の複数の部位を標的とするプラスミドのプール
  トランスフェクションによる導入に対応

設計バリエーション

CRISPRs +/- HDR

• TGase2 CRISPR/Cas9 KOプラスミド（m）およびTGase2 CRISPR/Cas9 KOプラスミド（m2）によってコードされるgRNAは、Tgm2遺伝子座内の異なる部位を標的としています。いずれか一方、または両方の標的設計が利用可能な場合があります。入手可能性については「関連製品」を参照してください。
  TGase2 HDRプラスミド（m）および TGase2 HDRプラスミド（m2）によってコードされるHDRドナー構築体は、プロマイシン耐性カセットとRFPレポーターを含み、これらはTgm2ホモロジーアームに挟まれており、CRISPR/Cas9 KO設計に対応する特定のTgm2標的部位でのホモロジー依存修復をサポートします。HDRドナーの入手可能性は異なる場合があります。入手可能性については「関連製品」をご確認ください。

研究用のみ。診断用または治療用ではありません。