TFIIIB90-1 Plasmídeo CRISPR/Cas9 KO (h): sc-405826

Visão geral

BRF1 codifica a subunidade TFIIIB90-1 do fator de transcrição IIIB, um componente central da maquinaria de iniciação da RNA polimerase III, necessária para a transcrição de tRNAs, rRNA 5S e outros pequenos RNAs não codificantes. Por meio da montagem com TBP e BDP1 em promotores da Pol III, a TFIIIB90-1 sustenta o engajamento com a cromatina, a formação do complexo de pré-iniciação e a regulação da capacidade de tradução celular e de programas de crescimento. A produção da Pol III é rigidamente acoplada à detecção de nutrientes e à sinalização proliferativa, conectando a função de BRF1 à biogênese de ribossomos, à proteostase e à adaptação ao estresse. A transcrição desregulada pela Pol III e a atividade alterada de TFIIIB são frequentemente associadas a estados oncogênicos e a outros distúrbios caracterizados por demanda biossintética aberrante e controle do ciclo celular.

O Plasmídeo CRISPR/Cas9 KO TFIIIB90-1 (h) é um conjunto de plasmídeos concebido para a interrupção direcionada do gene BRF1 em linhas celulares human. Cada plasmídeo coexpressa um RNA guia único (sgRNA) direcionado a um local distinto dentro do BRF1, juntamente com a nuclease Cas9 de Streptococcus pyogenes. Os plasmídeos também codificam GFP, permitindo a identificação fluorescente e o enriquecimento de células transfectadas com sucesso por microscopia de fluorescência ou citometria de fluxo.

O design multiguia aumenta a probabilidade de gerar inserções ou deleções (indels) que interrompem o quadro de leitura aberto do BRF1 na sequência da formação de quebras de cadeia dupla mediadas por Cas9. As quebras de ADN introduzidas pelo sistema CRISPR/Cas9 são reparadas através de vias endógenas de junção de extremidades não homólogas (NHEJ), resultando frequentemente em mutações de deslocamento de quadro que abolir a expressão da proteína TFIIIB90-1.

Este sistema de knockout CRISPR permite a geração eficiente de modelos celulares com deficiência de BRF1 para a investigação da sinalização de TFIIIB90-1, estudos de genómica funcional, investigação em biologia do cancro e avaliação de respostas terapêuticas em linhas celulares humanas.

Características principais

• sgRNAs direcionados para o(s) exão(ões) BRF1 críticos para a função TFIIIB90-1
  Coexpressão de SpCas9 e sgRNA a partir de um único plasmídeo para simplificar a administração
  Repórter GFP para identificação de células transfectadas
  Conjunto de plasmídeos direcionados para múltiplos locais genómicos BRF1 para melhorar a eficiência do knockout
  Compatível com administração por transfecção

Variantes de Design

CRISPRs +/- HDRs

• Os gRNAs codificados pelo TFIIIB90-1 Plasmídeo CRISPR/Cas9 KO (h) e pelo TFIIIB90-1 Plasmídeo CRISPR/Cas9 KO (h2) têm como alvo locais distintos dentro do locus BRF1. Pode estar disponível um ou ambos os designs de alvo. Consulte Produtos Relacionados para verificar a disponibilidade.
  As construções doadoras HDR codificadas pelo TFIIIB90-1 Plasmídeo HDR (h) e o Plasmídeo HDR TFIIIB90-1 (h2) contêm uma cassete de resistência à puromicina e um repórter RFP flanqueado por braços de homologia BRF1 para suportar a reparação dirigida por homologia em locais-alvo BRF1 definidos, correspondentes aos desenhos de KO CRISPR/Cas9. A disponibilidade do doador HDR pode variar. Consulte Produtos Relacionados para verificar a disponibilidade.

Apenas para uso em investigação. Não se destina a uso diagnóstico ou terapêutico.