The Double Nickase Plasmid features a U6 promoter for sgRNA expression, a 20 nt targeting sequence, and a gRNA scaffold to guide Cas9n. It includes a CBh promoter for Cas9n (D10A) and puromycin resistance, GFP for transfection verification, and nuclear localization signals (NLS). The 2A peptide allows co-expression of Cas9n and Puro from a single promoter, enabling precise genome editing with reduced off-target effects.
TFIIE-α双切口酶质粒(h): sc-404654-NIC
- 针对种属：human
- 20 µg 纯化的即用型的质粒DNA，最多可供20次转染
- TFIIE-α 双切口酶质粒（h）含有一对质粒，分别编码D10A突变的Cas9核酸酶，和目标特异的 20 nt 向导RNA （gRNA），与其相应的/%base_sku_name%/ CRISPR/Cas9敲除质粒相比，它在基因敲除方面具有更好的特异性
- 成对的向导RNA序列与目标基因中约20个碱基对互补，从而使Cas9可以模仿DNA双链断裂（DSB），介导特异的基因组DNA双切割
- 质粒对中的一个包含供筛选使用的嘌呤霉素抗性基因；另一个包含供观察转染使用的绿色荧光蛋白标记
- TFIIE-α双切酶质粒（h）和TFIIE-α双切酶质粒（h2）编码针对GTF2E1的不同配对gRNA设计。其中一种或两种设计可能均有提供
- 转染后，基因敲除效率可以用抗体：TFIIE-α: sc-133064，通过WB, IF或者IHC分析
订购信息
| 产品名称 | 产品编号 | 规格 | 价格 | 数量 | 收藏夹 | |
TFIIE-α双切口酶质粒(h) | sc-404654-NIC | 20 µg | $410.00 | |||
TFIIE-α双切口酶质粒(h2) | sc-404654-NIC-2 | 20 µg | $410.00 |
GTF2E1 编码转录因子 IIE（TFIIE）的 α 亚基（TFIIE-α），这是 RNA 聚合酶 II 预起始复合体的关键组成部分，对准确选择转录起始位点必不可少。TFIIE 与 TFIIF 和 TFIIH 协同作用，促进启动子解旋与转录起始，从而使 GTF2E1 与依赖 Pol II 驱动转录的核心基因表达程序及细胞应答相联系。通过调控基础转录，TFIIE-α 影响细胞周期进程、分化以及应激适应性的转录重塑等过程。一般转录机制的失调已被认为与发育障碍及肿瘤相关的转录依赖性有关，因此 GTF2E1 是开展转录调控机制研究的一个有用节点。
TFIIE-α 双切酶质粒（h）由一对匹配的质粒组成，专为在 human 细胞系中对 GTF2E1 位点进行高特异性编辑而设计。每个质粒分别表达Cas9 D10A切口酶和针对GTF2E1内不同DNA链的独特sgRNA。当这两种切口酶被引导至相邻但位于DNA链相反侧的位点时，会产生错位的单链切口，从而共同形成错位双链断裂，这需要两个引导RNA在靶位点上协同发挥作用。由此产生的DNA断裂通过内源性细胞修复途径（最常见的是非同源末端连接（NHEJ））得到修复，从而导致插入或缺失，进而破坏GTF2E1的功能。通过要求双sgRNA在靶位点结合，双切口方法提高了编辑特异性，并为需要对靶向精度进行额外控制的应用提供了互补的CRISPR策略。
为高效识别编辑后的细胞，其中一个质粒编码GFP以实现转染细胞群的荧光可视化，而配套质粒则携带嘌呤霉素抗性基因用于抗生素筛选。这些特性共同支持共转染细胞群的高效富集，并简化了GTF2E1基因失活克隆的验证流程。
仅供研究使用。不用于诊断或治疗。