TFII-I Plasmide Double Nickase (h): sc-403153-NIC

GTF2I codifica TFII-I, un fattore di trascrizione multifunzionale che collega input dipendenti dal segnale ai programmi di espressione genica legandosi a elementi promotoriali e integrando vie di risposta al calcio e ai fattori di crescita. TFII-I partecipa alla regolazione dei geni a risposta immediata, dei programmi del ciclo cellulare e di differenziamento, e contribuisce al coordinamento della trascrizione con complessi di segnalazione nucleare. Alterazioni dell’attività e del dosaggio di GTF2I sono state associate a fenotipi di neurosviluppo e a stati trascrizionali correlati al sistema immunitario, e modifiche genetiche ricorrenti implicano reti dipendenti da TFII-I nel rimodellamento regolatorio associato alla malattia. Queste caratteristiche rendono TFII-I un nodo utile per analizzare il controllo trascrizionale, la regolazione genica in risposta agli stimoli e circuiti regolatori specifici del contesto nelle cellule umane.

TFII-I Il plasmide Double Nickase (h) consiste in una coppia di plasmidi ingegnerizzati per l'editing ad alta specificità del locus GTF2I nelle linee cellulari human. Ciascun plasmide esprime una nickasi Cas9 D10A e un sgRNA distinto che prende di mira filamenti di DNA opposti all'interno di GTF2I. Quando indirizzate verso siti adiacenti su filamenti di DNA opposti, le due nickasi generano tagli a filamento singolo sfalsati che insieme producono una rottura a doppio filamento sfalsata, richiedendo un'attività coordinata sul bersaglio da entrambe le guide. La rottura del DNA risultante viene risolta da vie di riparazione cellulare endogene, più comunemente attraverso la giunzione non omologa delle estremità (NHEJ), portando a inserzioni o delezioni che interrompono la funzione di GTF2I. Richiedendo il coinvolgimento di due sgRNA nel locus bersaglio, l'approccio a doppia nickasi migliora la specificità dell'editing e fornisce una strategia CRISPR complementare per applicazioni in cui è desiderato un controllo aggiuntivo sulla precisione del targeting.

Per supportare l'identificazione efficiente delle cellule modificate, un plasmide codifica la GFP per la visualizzazione fluorescente delle popolazioni trasfettate, mentre il plasmide di accompagnamento porta un gene di resistenza alla puromicina per la selezione antibiotica. Insieme, queste caratteristiche supportano l'arricchimento efficiente delle popolazioni co-trasfettate e semplificano la convalida dei cloni con GTF2I interrotto.

Solo per uso di ricerca. Non destinato a uso diagnostico o terapeutico.