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TFEB慢病毒激活颗粒(h) | sc-401388-LAC | 200 µl | $455.00 |
转录因子EB(TFEB)是溶酶体生物发生与自噬的主调控因子,通过协调CLEAR网络的表达来维持蛋白质稳态,并帮助细胞适应营养与氧化应激。TFEB活性受包括营养感知通路在内的机制严格调控,其中mTORC1依赖的磷酸化会使其滞留于细胞质;在应激条件下,TFEB转位入核,从而启动溶酶体–自噬相关基因程序。通过调控内体-溶酶体运输、脂质分解代谢以及线粒体质量控制,TFEB在多种细胞类型中影响炎症信号与代谢稳态。TFEB信号失调已被认为与溶酶体贮积症、神经退行性疾病模型、癌细胞适应以及心代谢功能障碍有关,使其成为在人源系统中进行通路解析的一个关键节点。
TFEB 慢病毒激活颗粒(h)通过将完整的协同激活介导体(SAM)转录激活系统包装到可直接转导的高滴度慢病毒颗粒中,满足了这一需求,从而能够在更广泛的人类细胞类型中高效上调 TFEB 表达。
TFEB 慢病毒激活颗粒(h)通过慢病毒转导递送协同激活介导体(SAM)系统的所有功能组分。该系统包含三种共同转导至靶细胞的颗粒制剂:一种编码与VP64转激活域融合的无催化活性的dCas9(D10A和N863A突变),并携带布拉西定抗性基因; 一种编码MS2-p65-HSF1融合蛋白并携带潮霉素抗性基因的制剂;以及一种编码靶标特异性20 nt sgRNA(与两个MS2 RNA适配体融合)并携带嘌呤霉素抗性基因的制剂。经过慢病毒转导和表达盒的基因组整合后,SAM组分得以稳定表达,并在TFEB转录起始位点上游的近端启动子区域内的靶位点组装。在此处,VP64、p65和HSF1协同作用,招募内源性转录 machinery,从而驱动内源性TFEB表达的持续上调。使用无核酸酶活性的 dCas9 可避免引入双链 DNA 断裂,并保留原生的 TFEB 基因组位点和调控架构。
慢病毒载体具有多项实用优势:稳定的基因组整合支持细胞分裂过程中的可遗传激活;高滴度颗粒制剂免去了内部病毒生产的需要;且与原代细胞、非增殖细胞及转染抗性细胞类型的兼容性,扩大了实验的可及性。可通过嘌呤霉素、潮霉素和布拉西定进行三重抗生素筛选,以确认并富集成功的转导。
仅供研究使用。不用于诊断或治疗。