Partículas Lentivirales de Activación (m) TET1: sc-424616-LAC

El gen Tet1 de ratón codifica TET1, una dioxigenasa dependiente de Fe(II)/2-oxoglutarato que cataliza la oxidación de la 5‑metilcitosina a 5‑hidroximetilcitosina y a otros derivados, favoreciendo la desmetilación activa del ADN. Mediante esta actividad de remodelación epigenética, TET1 contribuye al control transcripcional, la regulación de potenciadores (enhancers), la impronta genómica y el mantenimiento de la pluripotencia y la especificación de linaje durante el desarrollo. La hidroximetilación del ADN dependiente de TET1 se integra con procesos asociados a la cromatina y a la reparación del ADN para moldear programas de expresión génica en células en proliferación y en diferenciación. La alteración de la regulación de TET/5hmC se ha relacionado con una diferenciación desregulada y con cambios globales de metilación relevantes para la biología del cáncer y para fenotipos del neurodesarrollo, lo que convierte a Tet1 en una diana clave para estudios mecanísticos de epigenética.

Las partículas de activación lentiviral TET1 (m) responden a esta necesidad al empaquetar el sistema completo de activación transcripcional del mediador de activación sinérgica (SAM) en partículas lentivirales de alto título listas para la transducción, lo que permite una regulación al alza eficiente de Tet1 en una gama más amplia de tipos de células humanas.

Las partículas de activación lentiviral TET1 (m) suministran todos los componentes funcionales del sistema mediador de activación sinérgica (SAM) a través de la transducción lentiviral. El sistema comprende tres preparaciones de partículas cotransducidas en las células diana: una que codifica dCas9 catalíticamente inactivo (mutaciones D10A y N863A) fusionado al dominio de transactivación VP64 con un gen de resistencia a la blasticidina; otra que codifica la proteína de fusión MS2-p65-HSF1 con un gen de resistencia a la higromicina; y otra que codifica un ARN guía (sgRNA) específico del objetivo de 20 nt fusionado a dos aptámeros de ARN MS2 con un gen de resistencia a la puromicina. Tras la transducción lentiviral y la integración genómica de los casetes de expresión, los componentes del SAM se expresan de forma estable y se ensamblan en el locus diana dentro de la región promotora proximal, aguas arriba del sitio de inicio de la transcripción Tet1, donde VP64, p65 y HSF1 actúan de forma cooperativa para reclutar la maquinaria transcripcional endógena e impulsar la regulación al alza sostenida de la expresión endógena de TET1. El uso de dCas9 inactivo frente a nucleasas evita la introducción de roturas de ADN de doble cadena y preserva el locus genómico nativo Tet1 y la arquitectura reguladora.

El formato lentiviral ofrece varias ventajas prácticas: la integración genómica estable permite la activación hereditaria a lo largo de las divisiones celulares; las preparaciones de partículas de alto título eliminan la necesidad de producir el virus internamente; y la compatibilidad con tipos de células primarias, no divisibles y resistentes a la transfección amplía la accesibilidad experimental. La transducción exitosa puede confirmarse y enriquecerse mediante selección con triple antibiótico utilizando puromicina, higromicina y blasticidina.

Sólo para uso en investigación. No destinado a uso diagnóstico o terapéutico.