TET1 Double Nickaseプラスミド (h): sc-400845-NIC

TET1はメチルシトシンジオキシゲナーゼをコードしており、5-メチルシトシンを5-ヒドロキシメチルシトシン（5hmC）およびさらに酸化された誘導体へと段階的に酸化する反応を触媒することで、能動的および受動的なDNA脱メチル化を支えます。CpGメチル化のランドスケープを調節することを通じて、TET1は転写制御、エンハンサー活性、そして細胞運命決定や発生プログラムを形作るクロマチン状態の転換に寄与します。さらにTET1は、DNAメチルトランスフェラーゼ、塩基除去修復（BER）系の構成因子、クロマチン修飾因子などを含むエピジェネティック制御ネットワークと統合的に働き、ゲノム全体にわたるエピゲノムの可塑性を維持します。TET1活性や5hmC分布の変化は、がん生物学、神経発生過程、免疫細胞分化でみられる遺伝子発現の異常制御と関連しており、エピジェネティック不安定性の機序研究における有用な焦点となります。

TET1 ダブルニカースプラスミド（h）は、human 細胞株における TET1 座の高特異性編集のために設計された、対となる2つのプラスミドから構成される。各プラスミドは、Cas9 D10Aニカースと、TET1内の対向するDNA鎖を標的とする異なるsgRNAを発現する。対向するDNA鎖上の隣接する部位に誘導されると、2つのニカースはオフセットした一本鎖切断を生成し、これらが組み合わさってずれた二本鎖切断を生じさせる。これにより、両方のガイドによる協調的なオンターゲット活性が必要となる。生じたDNA切断は、細胞内の内在性修復経路、特に非相同末端結合（NHEJ）によって修復され、その結果、TET1の機能を阻害する挿入または欠失が生じる。標的座標における2つのsgRNAの結合を必要とするこの二重ニッキング法は、編集の特異性を高め、標的精度に対するさらなる制御が求められる用途において、CRISPR戦略を補完するものである。

編集された細胞を効率的に同定するために、1つのプラスミドはトランスフェクトされた細胞集団を蛍光可視化するためのGFPをコードし、もう1つのプラスミドは抗生物質選別用のプロマイシン耐性遺伝子を保有しています。これらの機能により、共トランスフェクトされた細胞集団の効率的な濃縮が可能となり、TET1が破壊されたクローンの検証が簡素化されます。

研究用のみ。診断用または治療用ではありません。