TET1 CRISPR/Cas9 KOプラスミド (h): sc-400845

概要

TET1（ten-eleven translocation methylcytosine dioxygenase 1）は、Fe(II)/2-オキソグルタル酸依存性ジオキシゲナーゼであり、5-メチルシトシンを5-ヒドロキシメチルシトシン（5hmC）およびさらに酸化された誘導体へと酸化する反応を触媒します。これにより、能動的なDNA脱メチル化とエピジェネティックなリモデリングが促進されます。TET1は転写調節因子やクロマチン関連複合体との相互作用を通じて、プロモーターやエンハンサーのメチル化状態を形成し、細胞アイデンティティ、分化、ゲノム安定性に影響を与えます。TET1に関連した5hmCランドスケープの変化は、がんや神経発達の文脈における遺伝子発現プログラムの破綻と関連付けられており、DNMTなど他のDNAメチル化機構や、IDH依存性の代謝経路とあわせて検討されることが多いです。エピジェネティックな「書き込み／消去」の接点として、TET1は、メチル化依存的なシグナルネットワーク制御や系譜特異的転写の解析に広く利用されています。

TET1 CRISPR/Cas9 KOプラスミド（h）は、human細胞株におけるTET1遺伝子の標的破壊を目的として設計されたプラスミドのプールである。各プラスミドは、TET1内の異なる部位を標的とする固有のシングルガイドRNA（sgRNA）と、Streptococcus pyogenes由来のCas9ヌクレアーゼを共発現します。また、これらのプラスミドはGFPをコードしており、蛍光顕微鏡やフローサイトメトリーを用いて、トランスフェクションに成功した細胞を蛍光で識別・濃縮することが可能です。

このマルチガイド設計により、Cas9による二本鎖切断の形成後に、TET1のオープンリーディングフレームを破壊する挿入または欠失（インデル）が生じる可能性が高まります。CRISPR/Cas9システムによって導入されたDNA切断は、内因性の非相同末端結合（NHEJ）経路を通じて修復され、その結果、TET1タンパク質の発現を阻害するフレームシフト変異が生じることが頻繁にあります。

このCRISPRノックアウトシステムにより、TET1シグナル伝達、機能ゲノミクス研究、がん生物学研究、およびヒト細胞株における治療反応の評価を目的とした、TET1欠損細胞モデルの効率的な作製が可能となる。

主な特徴

• TET1の機能に不可欠なTET1エクソンを標的とするsgRNA
  導入を簡素化するための、単一プラスミドからのSpCas9およびsgRNAの共発現
  トランスフェクトされた細胞を識別するためのGFPレポーター
  ノックアウト効率を向上させるための、TET1ゲノム上の複数の部位を標的とするプラスミドのプール
  トランスフェクションによる導入に対応

設計バリエーション

CRISPRs +/- HDR

• TET1 CRISPR/Cas9 KOプラスミド（h）およびTET1 CRISPR/Cas9 KOプラスミド（h2）によってコードされるgRNAは、TET1遺伝子座内の異なる部位を標的としています。いずれか一方、または両方の標的設計が利用可能な場合があります。入手可能性については「関連製品」を参照してください。
  TET1 HDRプラスミド（h）および TET1 HDRプラスミド（h2）によってコードされるHDRドナー構築体は、プロマイシン耐性カセットとRFPレポーターを含み、これらはTET1ホモロジーアームに挟まれており、CRISPR/Cas9 KO設計に対応する特定のTET1標的部位でのホモロジー依存修復をサポートします。HDRドナーの入手可能性は異なる場合があります。入手可能性については「関連製品」をご確認ください。

研究用のみ。診断用または治療用ではありません。