TET1 Plasmídeo de ativação de CRISPR (h): sc-400845-ACT

A TET1 humana (ten-eleven translocation methylcytosine dioxygenase 1) é uma dioxigenase dependente de Fe(II)/2-oxoglutarato que catalisa a oxidação da 5-metilcitosina em 5-hidroximetilcitosina e em derivados ainda mais oxidados, iniciando a desmetilação ativa do DNA. Por meio dessa atividade, a TET1 molda a regulação epigenética da transcrição, o estado da cromatina e programas gênicos do desenvolvimento, influenciando processos como especificação de linhagem, estabilidade do genoma e respostas a danos no DNA. O remodelamento, dependente de TET1, dos padrões de metilação do DNA interage com redes transcricionais e modificadores de cromatina para controlar a atividade de enhancers e promotores. A expressão desregulada de TET1 ou paisagens alteradas de 5hmC têm sido associadas a estados transcricionais aberrantes no câncer e a alterações epigenéticas relevantes para o neurodesenvolvimento e a regulação imune, tornando-a um alvo-chave para estudos mecanísticos de fenótipos dirigidos pelo epigenoma.

TET1 O Plasmídeo de Ativação CRISPR (h) oferece uma abordagem direcionada e não destrutiva para regular positivamente a expressão endógena de TET1 sem alterar a sequência de ADN subjacente.

TET1 O Plasmídeo de Ativação CRISPR (h) é um sistema mediador de ativação sinérgica (SAM) de três plasmídeos, concebido para a regulação positiva transcricional altamente eficiente e específica do locus TET1 em linhas celulares humanas. O sistema é construído em torno de uma Cas9 cataliticamente inativa (dCas9) portadora de duas mutações inativadoras (D10A e N863A) que eliminam a atividade nuclease, preservando simultaneamente a ligação ao ADN. Esta dCas9 é fundida com VP64, um potente ativador transcricional, e é coexpressa com um gene de resistência à blasticidina para seleção. O segundo plasmídeo codifica a proteína de fusão MS2-p65-HSF1, um complexo ativador secundário que atua em conjunto com o dCas9-VP64, juntamente com um gene de resistência à higromicina. O terceiro plasmídeo codifica um sgRNA de 20 nt específico para o alvo, fundido a dois aptâmeros de RNA MS2 que recrutam o complexo MS2-p65-HSF1 para o local de ativação, acompanhado por um gene de resistência à puromicina. Os três plasmídeos são administrados numa proporção de massa de 1:1:1 para uma expressão equilibrada de todos os componentes do sistema.

Uma vez montado no locus alvo, o complexo SAM liga-se a cerca de 200 pb a montante do local de início da transcrição TET1, onde VP64, p65 e HSF1 atuam em conjunto para recrutar a maquinaria transcricional e impulsionar a regulação positiva da expressão endógena de TET1. Ao contrário da Cas9 com atividade nuclease, o dCas9 não introduz quebras de cadeia dupla nem modifica a sequência genómica, preservando o locus TET1 nativo e permitindo o estudo de respostas transcricionais dependentes de TET1 no locus endógeno, tornando-o uma ferramenta valiosa para estudos funcionais, identificação de genes-alvo e modelagem da restauração da via TET1 em células tumorais com expressão de TET1 silenciada ou reduzida.

Apenas para uso em investigação. Não se destina a uso diagnóstico ou terapêutico.