TEM8 CRISPR Activationプラスミド (h2): sc-404903-ACT-2

ヒトのANTXR1は腫瘍内皮マーカー8（TEM8）をコードしており、TEM8は細胞表面に存在する炭疽毒素受容体として、接着およびマトリックス相互作用性タンパク質として機能し、内皮細胞の挙動や組織リモデリングに関与すると考えられている。TEM8は細胞外マトリックス成分に結合し、細胞骨格の構築や受容体媒介性エンドサイトーシスに寄与することで、ANTXR1の活性を血管新生プログラムや微小環境シグナル伝達と結び付ける。遺伝学的および機能的研究により、ANTXR1は血管発生に関わる表現型や細胞外マトリックスの恒常性破綻（調節異常）と関連づけられており、腫瘍関連血管や結合組織の恒常性に影響する疾患との関連も示唆されている。ANTXR1の遺伝子編集により、TEM8依存的な輸送（トラフィッキング）および接着経路の機序解析、内皮—マトリックス相互作用の解析、さらに経路解析や機能ゲノミクス研究のためのアイソジェニックな細胞モデルの構築が可能となる。

TEM8 CRISPR活性化プラスミド（h2）は、基盤となるDNA配列を変更することなく、内因性ANTXR1の発現を標的化し、非破壊的にアップレギュレートするアプローチを提供します。

TEM8 CRISPR 活性化プラスミド (h2) は、ヒト細胞株における ANTXR1 遺伝子座の高効率かつ部位特異的な転写アップレギュレーションのために設計された、3 つのプラスミドからなる相乗的活性化メディエーター (SAM) システムです。このシステムは、DNA結合能を維持しつつヌクレアーゼ活性を失わせる2つの不活性化変異（D10AおよびN863A）を有する、触媒活性のないCas9（dCas9）を中核としています。このdCas9は、強力な転写活性化因子であるVP64と融合しており、選別用のブラスティシジン耐性遺伝子と共に共発現します。2番目のプラスミドは、dCas9-VP64と協調して機能する二次活性化複合体であるMS2-p65-HSF1融合タンパク質をコードしており、ヒグロマイシン耐性遺伝子と共に発現する。3番目のプラスミドは、標的特異的な20塩基対のsgRNAをコードしており、これはMS2-p65-HSF1複合体を活性化部位に誘導する2つのMS2 RNAアプタマーと融合しており、さらにピューロマイシン耐性遺伝子が付随している。これら3つのプラスミドは、システム構成要素すべてが均等に発現するよう、質量比1:1:1で導入される。

標的遺伝子座に集合すると、SAM複合体はANTXR1転写開始点の上流約200 bpの領域に結合し、そこでVP64、p65、およびHSF1が協調して転写装置を動員し、内因性TEM8の発現上昇を促進する。ヌクレアーゼ活性を持つCas9とは異なり、 dCas9は二本鎖切断を導入したりゲノム配列を改変したりしないため、天然のANTXR1遺伝子座が保持され、内因性遺伝子座におけるTEM8依存性の転写応答の研究が可能となります。これにより、機能解析、標的遺伝子の同定、およびANTXR1発現が沈黙または低下した腫瘍細胞におけるTEM8経路の回復のモデル化を行う上で、貴重なツールとなります。

研究用のみ。診断用または治療用ではありません。