TECK Plásmido CRISPR/Cas9 KO (m): sc-422841

Descripción general

Ccl25 codifica la quimiocina expresada en el timo (TECK), una quimiocina CC que señala principalmente a través de CCR9 para dirigir la migración quimiotáctica y el posicionamiento de leucocitos CCR9+. En el ratón, TECK contribuye al tráfico de células inmunitarias dentro de los microambientes tímicos y los tejidos mucosos, modelando el homing de linfocitos, la vigilancia tisular y la organización inmunitaria regional. La señalización aguas abajo activa vías dependientes de GPCR, incluidas PI3K/AKT y las cascadas MAPK, que regulan la motilidad, la adhesión y la remodelación del citoesqueleto. La actividad desregulada del eje Ccl25–CCR9 se ha implicado en la infiltración inmunitaria inflamatoria y en una localización alterada de linfocitos, relevante para modelos de inflamación mucosa y de distribución de células inmunitarias asociadas a tumores.

El plásmido CRISPR/Cas9 KO TECK (m) es un conjunto de plásmidos diseñado para la interrupción dirigida del gen Ccl25 en líneas celulares mouse. Cada plásmido coexpresa un ARN guía único (sgRNA) dirigido a un sitio distinto dentro del Ccl25 junto con la nucleasa Cas9 de Streptococcus pyogenes. Los plásmidos también codifican GFP, lo que permite la identificación fluorescente y el enriquecimiento de las células transfectadas con éxito mediante microscopía de fluorescencia o citometría de flujo.

El diseño multiguía aumenta la probabilidad de generar inserciones o deleciones (indeles) que interrumpan el marco de lectura abierto de Ccl25 tras la formación de roturas de doble cadena mediadas por Cas9. Las roturas de ADN introducidas por el sistema CRISPR/Cas9 se reparan a través de vías endógenas de unión de extremos no homólogos (NHEJ), lo que con frecuencia da lugar a mutaciones de desplazamiento del marco de lectura que anulan la expresión de la proteína TECK.

Este sistema de knockout CRISPR permite la generación eficiente de modelos celulares deficientes en Ccl25 para la investigación de la señalización de TECK, estudios de genómica funcional, investigación en biología del cáncer y evaluación de respuestas terapéuticas en líneas celulares humanas.

Características principales

• sgRNA dirigidos a los exones de Ccl25 críticos para la función de TECK
  Coexpresión de SpCas9 y sgRNA a partir de un único plásmido para simplificar la administración
  Reportero GFP para la identificación de células transfectadas
  Conjunto de plásmidos dirigidos a múltiples sitios genómicos de Ccl25 para mejorar la eficiencia del knockout
  Compatible con la administración mediante transfección

Variantes de diseño

CRISPRs +/- HDRs

• Los gRNA codificados por el plásmido TECK CRISPR/Cas9 KO (m) y el plásmido TECK CRISPR/Cas9 KO (m2) se dirigen a sitios distintos dentro del locus Ccl25. Puede estar disponible uno o ambos diseños de orientación. Consulte «Productos relacionados» para conocer la disponibilidad.
  Las construcciones donantes HDR codificadas por el plásmido HDR TECK (m) y el plásmido HDR TECK (m2) contienen un casete de resistencia a la puromicina y un reportero RFP flanqueado por brazos de homología Ccl25 para facilitar la reparación dirigida por homología en sitios diana Ccl25 definidos que se corresponden con los diseños de KO de CRISPR/Cas9. La disponibilidad de los donantes HDR puede variar. Consulte «Productos relacionados» para conocer la disponibilidad.

Sólo para uso en investigación. No destinado a uso diagnóstico o terapéutico.