Not CRISPR data: the image illustrates antibody quality for visualizing CRISPR experiment results.
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TdT Plasmídeo CRISPR/Cas9 KO (m): sc-423324
- alvos específicos: mouse
- 20 µg de plasmídeo de DNA pronto para transfecção; Suficiente para até 20 transfecções
- TdT O Plasmídeo CRISPR/Cas9 Knockout (KO) (m) é um conjunto de plasmídeos, cada um codificando a nuclease Cas9 e um RNA guia (gRNA) de 20 nt específico para o alvo, concebido para uma eficiência máxima de knockout utilizando sequências derivadas da biblioteca GeCKO v2
- As sequências de gRNA direcionam a Cas9 para induzir quebras de cadeia dupla (DSBs) específicas do local no locus genómico TdT, resultando no knockout do gene através da junção de extremidades não homólogas (NHEJ)
- Os genes de resistência à puromicina e RFP são flanqueados por sítios LoxP, permitindo a remoção de marcadores de seleção através da recombinase Cre (Cre Vector: sc-418923) após o estabelecimento de linhas celulares knockout estáveis
- Após a transfecção, a eficácia do processo de nocaute genético por ser testada WB, IF ou IHC usando o anticorpo:TdT Anticorpo (C-11): sc-393710
Informacoes sobre ordens
| Nome do Produto | Numero de Catalogo | UNID | Preco | Qde | FAVORITOS | |
TdT Plasmídeo CRISPR/Cas9 KO (m) | sc-423324 | 20 µg | $397.00 |
Visão geral
A DNA nucleotidiltransferase terminal (Dntt) codifica a desoxinucleotidil transferase terminal (TdT), uma polimerase de DNA independente de molde que adiciona nucleotídeos não templados às junções de recombinação V(D)J para gerar diversidade na região N. A TdT atua em linfócitos em desenvolvimento durante a montagem dos genes de receptores de antígeno, influenciando a amplitude do repertório por meio da modulação dos desfechos de ligação de extremidades e do processamento das junções. Sua atividade se intersecciona com fatores de reparo de quebras de dupla fita de DNA e de junção de extremidades não homólogas (NHEJ) que resolvem intermediários de recombinação. A expressão desregulada de Dntt ou a atividade aberrante de TdT é amplamente utilizada como característica molecular de estados linfoides imaturos e é relevante para estudos mecanísticos do desenvolvimento linfoide e da integridade do genoma durante a recombinação.
O Plasmídeo CRISPR/Cas9 KO TdT (m) é um conjunto de plasmídeos concebido para a interrupção direcionada do gene Dntt em linhas celulares mouse. Cada plasmídeo coexpressa um RNA guia único (sgRNA) direcionado a um local distinto dentro do Dntt, juntamente com a nuclease Cas9 de Streptococcus pyogenes. Os plasmídeos também codificam GFP, permitindo a identificação fluorescente e o enriquecimento de células transfectadas com sucesso por microscopia de fluorescência ou citometria de fluxo.
O design multiguia aumenta a probabilidade de gerar inserções ou deleções (indels) que interrompem o quadro de leitura aberto do Dntt na sequência da formação de quebras de cadeia dupla mediadas por Cas9. As quebras de ADN introduzidas pelo sistema CRISPR/Cas9 são reparadas através de vias endógenas de junção de extremidades não homólogas (NHEJ), resultando frequentemente em mutações de deslocamento de quadro que abolir a expressão da proteína TdT.
Este sistema de knockout CRISPR permite a geração eficiente de modelos celulares com deficiência de Dntt para a investigação da sinalização de TdT, estudos de genómica funcional, investigação em biologia do cancro e avaliação de respostas terapêuticas em linhas celulares humanas.
Características principais
- sgRNAs direcionados para o(s) exão(ões) Dntt críticos para a função TdT
Coexpressão de SpCas9 e sgRNA a partir de um único plasmídeo para simplificar a administração
Repórter GFP para identificação de células transfectadas
Conjunto de plasmídeos direcionados para múltiplos locais genómicos Dntt para melhorar a eficiência do knockout
Compatível com administração por transfecção
Variantes de Design
CRISPRs +/- HDRs
- Os gRNAs codificados pelo TdT Plasmídeo CRISPR/Cas9 KO (m) e pelo TdT Plasmídeo CRISPR/Cas9 KO (m2) têm como alvo locais distintos dentro do locus Dntt. Pode estar disponível um ou ambos os designs de alvo. Consulte Produtos Relacionados para verificar a disponibilidade.
As construções doadoras HDR codificadas pelo TdT Plasmídeo HDR (m) e o Plasmídeo HDR TdT (m2) contêm uma cassete de resistência à puromicina e um repórter RFP flanqueado por braços de homologia Dntt para suportar a reparação dirigida por homologia em locais-alvo Dntt definidos, correspondentes aos desenhos de KO CRISPR/Cas9. A disponibilidade do doador HDR pode variar. Consulte Produtos Relacionados para verificar a disponibilidade.
Apenas para uso em investigação. Não se destina a uso diagnóstico ou terapêutico.