Tctex2 CRISPR/Cas9 KOプラスミド (m): sc-423317

概要

Tcte3 は、微小管ベースの輸送過程に関与し、細胞の極性化や運動性を支えるダイニン軽鎖関連タンパク質である Tctex2 をコードします。マウスでは、Tctex2 はとくに繊毛および鞭毛の機能と強く関連しており、ダイニン駆動の運動やカーゴ輸送は、軸糸（アクソネーム）の動態や精子運動性に不可欠です。ダイニンの補助構成要素が障害されると、繊毛形成、鞭毛内輸送（IFT）、および中心体に関連した細胞内構造の組織化が乱れ、細胞シグナル伝達や発生パターニングに測定可能な影響を及ぼし得ます。そのため、Tcte3/Tctex2 は、繊毛関連表現型、雄性不妊モデル、ならびに細胞骨格輸送と組織恒常性を結び付ける機構の研究において重要な遺伝子です。

Tctex2 CRISPR/Cas9 KOプラスミド（m）は、mouse細胞株におけるTcte3遺伝子の標的破壊を目的として設計されたプラスミドのプールである。各プラスミドは、Tcte3内の異なる部位を標的とする固有のシングルガイドRNA（sgRNA）と、Streptococcus pyogenes由来のCas9ヌクレアーゼを共発現します。また、これらのプラスミドはGFPをコードしており、蛍光顕微鏡やフローサイトメトリーを用いて、トランスフェクションに成功した細胞を蛍光で識別・濃縮することが可能です。

このマルチガイド設計により、Cas9による二本鎖切断の形成後に、Tcte3のオープンリーディングフレームを破壊する挿入または欠失（インデル）が生じる可能性が高まります。CRISPR/Cas9システムによって導入されたDNA切断は、内因性の非相同末端結合（NHEJ）経路を通じて修復され、その結果、Tctex2タンパク質の発現を阻害するフレームシフト変異が生じることが頻繁にあります。

このCRISPRノックアウトシステムにより、Tctex2シグナル伝達、機能ゲノミクス研究、がん生物学研究、およびヒト細胞株における治療反応の評価を目的とした、Tcte3欠損細胞モデルの効率的な作製が可能となる。

主な特徴

• Tctex2の機能に不可欠なTcte3エクソンを標的とするsgRNA
  導入を簡素化するための、単一プラスミドからのSpCas9およびsgRNAの共発現
  トランスフェクトされた細胞を識別するためのGFPレポーター
  ノックアウト効率を向上させるための、Tcte3ゲノム上の複数の部位を標的とするプラスミドのプール
  トランスフェクションによる導入に対応

設計バリエーション

CRISPRs +/- HDR

• Tctex2 CRISPR/Cas9 KOプラスミド（m）およびTctex2 CRISPR/Cas9 KOプラスミド（m2）によってコードされるgRNAは、Tcte3遺伝子座内の異なる部位を標的としています。いずれか一方、または両方の標的設計が利用可能な場合があります。入手可能性については「関連製品」を参照してください。
  Tctex2 HDRプラスミド（m）および Tctex2 HDRプラスミド（m2）によってコードされるHDRドナー構築体は、プロマイシン耐性カセットとRFPレポーターを含み、これらはTcte3ホモロジーアームに挟まれており、CRISPR/Cas9 KO設計に対応する特定のTcte3標的部位でのホモロジー依存修復をサポートします。HDRドナーの入手可能性は異なる場合があります。入手可能性については「関連製品」をご確認ください。

研究用のみ。診断用または治療用ではありません。