TCP-11 Plasmide KO CRISPR/Cas9 (m): sc-423314

Panoramica

Tcp11 codifica la proteina associata agli spermatozoi TCP-11, un fattore arricchito nel testicolo implicato nelle fasi tardive della spermatogenesi e nella maturazione funzionale degli spermatozoi. TCP-11 è stata collegata a processi che modellano la struttura del flagello e ne regolano la motilità, influenzando la segnalazione associata alla capacitazione e la competenza fecondante. Nei modelli murini, un’alterata espressione o funzione di Tcp11 è associata a una ridotta qualità spermatica e a fenotipi di subfertilità, rendendolo rilevante per lo studio dei contributi genetici ai disturbi riproduttivi maschili. Il suo profilo di espressione ristretto ne supporta inoltre l’impiego come marcatore nella differenziazione delle cellule germinali e nella ricerca in tossicologia riproduttiva.

Il plasmide CRISPR/Cas9 KO TCP-11 (m) è un pool di plasmidi progettato per la distruzione mirata del gene Tcp11 in linee cellulari mouse. Ciascun plasmide co-esprime un singolo RNA guida (sgRNA) unico che prende di mira un sito distinto all'interno del Tcp11 insieme alla nucleasi Cas9 di Streptococcus pyogenes. I plasmidi codificano anche per la GFP, consentendo l'identificazione fluorescente e l'arricchimento delle cellule trasfettate con successo tramite microscopia a fluorescenza o citometria a flusso.

Il design multi-guida aumenta la probabilità di generare inserzioni o delezioni (indels) che interrompono il frame di lettura aperto Tcp11 a seguito della formazione di rotture a doppio filamento mediate da Cas9. Le rotture del DNA introdotte dal sistema CRISPR/Cas9 vengono riparate attraverso vie endogene di giunzione non omologa (NHEJ), che spesso provocano mutazioni con spostamento del frame che annullano l'espressione della proteina TCP-11.

Questo sistema di knockout CRISPR consente la generazione efficiente di modelli cellulari carenti di Tcp11 per lo studio della segnalazione di TCP-11, studi di genomica funzionale, ricerca sulla biologia del cancro e valutazione delle risposte terapeutiche in linee cellulari umane.

Caratteristiche principali

• sgRNA mirati agli esoni Tcp11 critici per la funzione di TCP-11
  Co-espressione di SpCas9 e sgRNA da un singolo plasmide per una somministrazione semplificata
  Reporter GFP per l'identificazione delle cellule trasfettate
  Pool di plasmidi mirati a più siti genomici di Tcp11 per migliorare l'efficienza del knockout
  Compatibile con la somministrazione tramite trasfezione

Varianti di progettazione

CRISPR +/- HDR

• Gli gRNA codificati dal TCP-11 CRISPR/Cas9 KO Plasmid (m) e dal TCP-11 CRISPR/Cas9 KO Plasmid (m2) prendono di mira siti distinti all'interno del locus Tcp11. Potrebbe essere disponibile uno o entrambi i design di targeting. Vedere Prodotti correlati per la disponibilità.
  I costrutti donatori HDR codificati dal TCP-11 Plasmide HDR (m) e il plasmide HDR TCP-11 (m2) contengono una cassetta di resistenza alla puromicina e un reporter RFP affiancato da bracci di omologia Tcp11 per supportare la riparazione diretta dall'omologia in siti bersaglio Tcp11 definiti corrispondenti ai disegni CRISPR/Cas9 KO. La disponibilità dei donatori HDR può variare. Vedere Prodotti correlati per la disponibilità.

Solo per uso di ricerca. Non destinato a uso diagnostico o terapeutico.