TCF7L2/TCF4 Particelle di Attivazione Lentivirale (h): sc-400607-LAC

TCF7L2 (noto anche come TCF4) codifica un fattore di trascrizione con dominio box del gruppo ad alta mobilità (HMG) che agisce come principale effettore nucleare della segnalazione canonica Wnt/β-catenina. Interagendo con la β-catenina e con co-regolatori, TCF7L2 controlla programmi trascrizionali dipendenti dal contesto che governano la specificazione del destino cellulare, la proliferazione e l’espressione di geni metabolici in molteplici tessuti. La sua rete di regolazione si interseca con il rimodellamento della cromatina e con l’attività degli enhancer, influenzando le decisioni di linea nei compartimenti epiteliali ed endocrini. Alterazioni genetiche e dell’espressione di TCF7L2 sono fortemente associate a cambiamenti dell’omeostasi del glucosio e al rischio di diabete di tipo 2; inoltre, la trascrizione Wnt-dipendente deregolata che coinvolge TCF7L2 è oggetto di studio nella tumorigenesi e nella biologia dello sviluppo.

Le particelle di attivazione lentivirale TCF7L2/TCF4 (h) rispondono a questa esigenza incapsulando il sistema completo di attivazione trascrizionale del mediatore di attivazione sinergica (SAM) in particelle lentivirali ad alto titolo pronte per la trasduzione, consentendo un'efficiente sovraregolazione di TCF7L2 in una gamma più ampia di tipi di cellule umane.

Le particelle di attivazione lentivirale TCF7L2/TCF4 (h) veicolano tutti i componenti funzionali del sistema del mediatore di attivazione sinergica (SAM) tramite trasduzione lentivirale. Il sistema comprende tre preparati di particelle co-trasdotti nelle cellule bersaglio: uno che codifica per dCas9 cataliticamente inattivo (mutazioni D10A e N863A) fuso al dominio di transattivazione VP64 con un gene di resistenza alla blasticidina; una che codifica la proteina di fusione MS2-p65-HSF1 con un gene di resistenza all'igromicina; e una che codifica un sgRNA di 20 nt specifico per il bersaglio fuso a due aptameri di RNA MS2 con un gene di resistenza alla puromicina. A seguito della trasduzione lentivirale e dell'integrazione genomica dei cassetti di espressione, i componenti del SAM vengono espressi in modo stabile e si assemblano nel locus bersaglio all'interno della regione promotrice prossimale a monte del sito di inizio della trascrizione TCF7L2, dove VP64, p65 e HSF1 agiscono in modo cooperativo per reclutare il machinery trascrizionale endogeno e guidare una sovraregolazione sostenuta dell'espressione endogena di TCF7L2/TCF4. L'uso di dCas9 inattivo nei confronti delle nucleasi evita l'introduzione di rotture del DNA a doppio filamento e preserva il locus genomico nativo TCF7L2 e l'architettura regolatoria.

Il formato lentivirale offre diversi vantaggi pratici: l'integrazione genomica stabile supporta l'attivazione ereditaria attraverso le divisioni cellulari; le preparazioni di particelle ad alto titolo eliminano la necessità di una produzione virale interna; e la compatibilità con tipi di cellule primarie, non in divisione e resistenti alla trasfezione amplia l'accessibilità sperimentale. Il successo della trasduzione può essere confermato e potenziato attraverso una selezione antibiotica tripla utilizzando puromicina, igromicina e blasticidina.

Solo per uso di ricerca. Non destinato a uso diagnostico o terapeutico.